Site Sponsors
  • Strem Chemicals - Nanomaterials for R&D
  • Oxford Instruments Nanoanalysis - X-Max Large Area Analytical EDS SDD
  • Park Systems - Manufacturer of a complete range of AFM solutions
Posted in | Nanomedicine | Nanoanalysis

Nagbibilang at Sizing virus sa Paggamit ng Mga Instrumentong NanoSight

Published on June 2, 2009 at 7:50 AM

Ang kakayahan ng NanoSight instrumento sa bilang at laki ng mga virus at ang kanilang mga aggregates sa likido suspensyon ay magiging increasingly mahalaga sa mga kasangkot sa pagbuo ng mga viral bakuna.

Viral bakuna ay mahulog sa ilalim ng 2 pangunahing mga kategorya:

  • Live (attenuated) bakuna
  • Pumatay (inactivated) bakuna

Ang isang live na attenuated bakuna ay kung saan ang poot ng virus ay nabawasan, tulad na kapag ang bakuna ay ibinibigay sa pasyente, ito induces isang immune tugon nang hindi nagdudulot ng clinical sakit. Virus ay magtiklop sa loob ng host at kaya magbigay ng kaligtasan para sa isang pinalawig na tagal ng panahon. Ang karamihan ng mga matagumpay na viral bakuna na mahulog sa ilalim ng kategorya kabilang ang mga bakuna para sa tigdas, biki, rubella, trangkaso, dilaw lagnat at poliyo.

Inactivated virus ay ginagamit sa mga kaso kung saan ang isang naaangkop na attenuated bakuna ay hindi pa binuo o sa mga kaso kung saan ang virus ay naisip na malamang na bumalik mula sa attenuated form, sa isang mas makamandag form ng virus. Ang virus ay hindi maaaring magtiklop sa loob ng katawan at samakatuwid ay karaniwang isang mas mababang tugon host sa bakuna at madalas maramihang doses ay kinakailangan. Ang pinaka-karaniwang inactivated viral bakuna isama tipus, kamandag ng aso at poliyo.

NanoSight ng papel sa proseso ng paglilinis ng virus
Ang pagpapaunlad ng mga viral bakuna ay nangangailangan ng mga virus na bihasa sa live na mga cell, harvested at pagkatapos purified. Bakuna tagagawa ay interesado sa pagsubaybay ang kadalisayan ng viral paghahanda sa iba't ibang key yugto ng proseso ng paglilinis at maunawaan ang concentration ng virus materyal kasalukuyan. May kung saan ang mga instrumento ng NanoSight nagdaragdag ng real halaga. Ang tipik-by-tinga diskarte sa sizing at pagbilang ng mga virus ay maaaring madaling makilala ang mga virus mula sa mas malaking cell labi at mataas na resolution bilang distribusyon ay maaaring gamitin upang kalkulahin ang bilang ng mga virus vs ang bilang ng mga aggregates virus. Pagtantya sa konsentrasyon ng mga virus sa kasalukuyan ay mahalaga sa pag-unawa ng ang pagkawala ng mga produkto sa bawat hakbang ng proseso ng paglilinis (at ay samakatuwid ay maaaring gamitin i-optimize ang proseso sa mga tuntunin ng produkto ani) at ring virus concentration ay mahalaga kapag sinusubukan upang maunawaan ang dosis sa huling produkto.

Live kumpara sa kabuuang viral titre at paghahambing sa assays infectivity
Ang kakayahan ng NanoSight pamamaraan sa laki at bilang isang virus kung ito ay live o hindi aktibo ay nagbibigay-daan sa ang mga gumagamit upang makakuha ng isang ideya ng mga kamag-anak na mga concentrations ng particle infective kumpara sa kabuuang mga particle kapag ginamit na may kaugnayan sa assays infectivity. Infectivity assays tulad ng mga assays plaka ay ang pinaka-malawak na ginamit na pamamaraan upang matantya ang live na viral titres sa bakuna pagyari. Upang tumpak na tumyak ng dami ng mga nakakahawang viral titres, mga pamamaraan na ito ay umaasa sa isang solong virion infecting isang solong cell sa isang kultura, ang kasunod na pagtitiklop at impeksyon ng pumapalibot cell sanhi ng isang plaka sa form na maaaring quantified.

Malinaw na ang mga assays nangangailangan ng virus na nakakahawa at bilang tulad ay hindi naaangkop para sa mga inactivated bakuna. Mga assays ay hindi account para sa mga virus na nawala infectivity habang ang proseso ng paglilinis sa isang live na attenuated bakuna. Bilang tulad, para sa mga nakatira na attenuated bakuna, isang viral titre bilang kinakalkula sa pamamagitan ng isang baso ng infectivity ay mag-iiba malaki mula sa kabuuang viral titre bilang binibilang ng diskarteng NanoSight. Ito ay madalas na natagpuan na ang ratio ng mga infective sa mga non-infective particle ay maaaring mag-iba 2 o kahit 3 mga order ng magnitude tulad na ratio ng infective virus ay 1 / 1000 ng kabuuang nilalaman ng tinga. Ito ay malinaw na implikasyon, kapag-unawa ng mga espiritu ng manufacturing proseso at mga hakbang na maaaring gawin upang mapabuti at i-optimize ang ani sa produkto na batay sa NanoSight mga data. Katulad sa pamamahala ng ang huling produkto, ang pagkakaroon ng mga di-nakakahawa virus ay din magbuod ng isang immune tugon (tulad ng bawat isang inactivated vaccine), isang kadahilanan na pangangailangan upang maisaalang-alang kapag pag-unawa ng dosis sa huling produkto.

Unawa sa pagsasama-sama ng mga virus
Ang NanoSight pamamaraan sinusukat ang laki ng tinga sa tinga-by-tinga na batayan at bilang tulad maaari bumuo ng mga mataas na resolution distribusyon sa laki ng tinga. Ang laki ng pamamahagi ay maaaring gamitin upang matantya ang mga kamag-anak na mga concentrations ng monomeric kumpara sa pinagsama-samang materyal na dahil sa ang katunayan na ang pamamaraan ay hindi lamang sinusukat tipik laki ngunit bilang ang bilang ng mga particle ng isang tiyak na laki. Ang ng husay aspeto ng ang pamamaraan ay nagbibigay ng isang mabilis na pananaw sa estado ng pagsasama-sama, bilang ay makikita sa imahe sa ibaba. Ang unang larawan ay nagpapakita ng isang mataas na purified paghahanda ng influenza virus habang ang pangalawang imahe ay nagpapakita ng isang sample na may isang mataas na antas ng pagsasama-sama. Independent ng isang numero ng pamamahagi, ang gumagamit ay maaaring mabilis at mapagkakatiwalaan na maunawaan ang mga estado ng pagsasama-sama sa loob ng isang paghahanda.

Infectivity assays ay hindi makilala sa pagitan ng pinagsama-samang at di-pinagsama-samang materyal sa isang viral paghahanda. Isang plaka ng bumubuo ng yunit ay maaaring maging isang solong virion o isang solong pinagsamang na naglalaman ng maraming mga potensyal na mga virus infective. Kung ang ibinibigay pinagsama-samang viral materyal ay maaaring de-pinagsama-samang sa Vivo at bilang tulad, isang baso ng infectivity maaaring mahalay pangmamata ang nakakahawa viral na nilalaman sa loob ng isang paghahanda.

Buod

  • Ang NanoSight pamamaraan ay maaaring gamitin bilang tool sa tumyak ng dami ang kabuuang nilalaman ng viral at maaaring gamitin sa tabi assays infectivity upang makalkula ang mga kamag-anak na mga concentrations ng nakakahawa sa mga di-nakakahawa virus sa isang live na attenuated bakuna
  • Ang NanoSight pamamaraan ay kainaman ay angkop upang makalkula ang viral titres sa inactivated bakuna - infectivity assays ay hindi maaaring magamit para sa mga bakuna
  • Viral concentrations ay mahalaga kapag sinusubukan upang maunawaan ang ani ng produkto, immune tugon at potensyal na allergenic reaksyon sa bakuna
  • Ang estado ng pagsasama-sama sa bawat hakbang ng proseso ng manufacturing at sa huling produkto at sinusubaybayan at sinusukat gamit ang pamamaraan ng NanoSight
  • Infectivity assays ay walang kakayahan upang magtangi ang mga solong virions mula sa pinagsama-samang viral materyal

Last Update: 11. October 2011 11:51

Tell Us What You Think

Do you have a review, update or anything you would like to add to this news story?

Leave your feedback
Submit