Biochemical ”På-Koppla” Kunde Lösa ProteinPurificationUtmaning

Published on October 20, 2009 at 6:53 PM

Droger som baseras på iscensatte proteiner, föreställer en ny gräns för farmaceutiska tillverkare. Efter Även de upptäcker ett protein som kan bilda basen av den nästa mirakel- drogen, emellertid, dem, måste att konfrontera ett longstanding problem: hur till jordbruksprodukter det stora antalet av proteinet i ett högt rent påstår. Nu kan ettinstitutionellt forskninglag däribland en biochemist på Nationalet Institute of Standards and Technology (NIST) ha found* en ny lösning i en enzymatic ”matberedare,” som de kan aktivera på ska.

Skidan (i gräsplan på bästa), med det önskade proteinet anknöt till den (i guling på rätten), första klibbar till det iscensatte enzymet (i lämnad blåttatbottom) - låta impurities och andra proteiner som ska tvättas bort. Därefter orsakar en avkok av att starta röda molekylar (pricker), enzymet för att klippa bort det önskade proteinet (på peka var skidan och proteinet förbinder), som kan samlas i ett rent, påstår. Skidan kan därefter tvättas bort och upprepade det processaa. Kreditera: NIST

Laget har funnit en effektiv metod av plockningen renade proteinmolekylar, genom att förändra ett enzym som smutsar bakteriebruk att bryta besegrar deras mat. I dess naturligt bilda, är detta skulle enzym av lite bruk att förgifta bärare, men laget har ändrat det, så att det kan aktiveras på det önskade ögonblicket. Genom att skapa i grunden ”, på-koppla” för enzym aktivitet, laget har funnit a långt för att avskilja en singel, önskat protein från blandningen av tusentals som frambrings av en bosatt cell, som återstår bioteknik den naturliga proteinfabriken av primat.

Bakterier använder enzymet som kallas subtilisin, som en sortera av matberedaren: Når de har producerat den internt, frigör de enzymet in i smutsa, var den använder ett litet ”blad” för att hugga av upp proteiner in i digestible lappar. Därför Att den kunde skada bakterie inre, har bladet en skyddande skida som kommer endast av en gång enzymet har gått ut cellen.

”Tilldras enzymet och skidan starkt till varje annat. Enzymet agerar först är att klippa skidan bort,” något att sägaNISTS Travis Gallagher. ”Tar metoden fördel av deras dragningsför att isolat proteinet som vi önskar.”,

Laget skapar först många ”sheathless” kopierar av enzymet, som ändras för att fungera endast i närvaroen av en starta molekyl liksom fluorförening. De ändrade enzymen är destinerade till ytbehandla av ett filter. Därefter iscensatte cellerna för laget samlas de bruk som ska frambringas antal av ett potentiellt terapeutiskt protein, varje kopierar av vilken har en subtilisinskida som fästas till den. Når de har skördat dessa proteiner tillsammans med tusentals andra, som växer i den cell- inre, filtrerar de blandningen till och med filtert, var protein-skidan parar fångas och knipan fastar till subtilisinstunderna vila av blandningsavrinningarna bort.

På detta peka, laget som deras knäpp kopplar. De tillfogar lite fluorförening, och enzymet klipp förbindelsen mellan skidan och protein som frigör det önskade proteinet - frigör av nästan alla impurities. ”Kan tekniken möjligtvis vara van vid erhåller något protein som du gillar, och det processaa är repeatable, som skidorna kan tas bort för en annan runda av purification,” Gallagher något att säga. ”För mest proteiner, kan metoden uppnå mer stor, än 95 procent renhet på en singel kliver.”,

Forskninglaget inkluderar också medlemmar från Potomac FrändskapProteiner, LLC (PAP) och Universitetar av det Maryland BioteknikInstitutet (UMBI). UMBI rymmer patent, som har licenserats till PAP. Forskningen stöttades av lån från MedborgareInstituten av Vård-, och Räkningen och Melindaen Utfärda utegångsförbud för Fundamentet.

* T. Gallagher, B. Ruan, M. London, M. Bryan och P.N. Bryan. Strukturera av en switchable subtilisin som är complexed med substraten och med activatoraziden. Biochemistry DATERAR, sidor, DOI.

Last Update: 25. January 2012 09:48

Tell Us What You Think

Do you have a review, update or anything you would like to add to this news story?

Leave your feedback
Submit