Avaliação Directa da Quinase em Amostras de Tecido Usando a Plataforma Integrada de Microfluidic e de Imagem Lactente

Published on November 2, 2010 at 4:08 AM

A sinalização Imprópria do crescimento e da sobrevivência, que conduz ao crescimento aberrante das células cancerosas, é uma força motriz atrás dos tumores.

Muita da investigação do cancro actual focaliza nas enzimas da quinase cujas as mutações são responsáveis para tal sinalização disregulated, e muito a terapêutica anticancerosa molecular visada bem sucedida é dirigida na actividade de inibição da quinase.

Agora, os pesquisadores do UCLA do Instituto do Crump para a Imagem Lactente Molecular, o Instituto para a Medicina Molecular, o Instituto de Califórnia NanoSystems, o Centro Detalhado do Cancro de Jonsson e o departamento da farmacologia molecular e médica desenvolveram in vitro um método para avaliar a actividade da quinase em amostras de tecido minúsculas dos pacientes. O método envolve uma plataforma integrada do microfluidics e da imagem lactente que possa reprodutìvel medir a actividade enzimático da quinase de somente 3.000 pilhas.

Em um papel o 1º de novembro publicado na Investigação do Cancro do jornal, os pesquisadores do UCLA descrevem diversos avanços tecnológicos novos na detecção que do microfluidics e da imagem lactente co-desenvolveram para medir a actividade da quinase em amostras da pequeno-entrada. A equipe aplicou seu ensaio microfluidic da quinase às amostras humanas do paciente da leucemia.

“Porque o dispositivo exige somente uma amostra de tecido muito pequena dar resultados, este método cria o potencial novo para a experimentação directa da quinase e diagnósticos no sangue paciente, a medula e a agulha fazem a biópsia amostras,” disse o investigador principal Thomas Graeber, um professor do UCLA da farmacologia molecular e médica. “Por exemplo, as propriedades da célula estaminal da leucemia podem directamente ser estudadas das amostras pacientes.”

Para melhorar a detecção do rádio-sinal, a equipe usou um detector novo da imagem lactente, sob a forma de uma beta câmera de circuito integrado, que pudesse sensìvel detectar e espacial resolver o sinal radioactivo directamente de uma microplaqueta microfluidic. A beta câmera fornece uma imagem da actividade na microplaqueta, permitindo a monitoração de tempo real do desempenho e do resultado do ensaio. É altamente sensível e quantitativa.

Em sua primeira aplicação do dispositivo, a equipe mediu a actividade da quinase transformada responsável para a leucemia myelogenous crônica. Esta mutação é visada pelo inibidor clìnica bem sucedido Gleevec da quinase.

“Nós não estamos cientes do outro trabalho que demonstra a imagem lactente radioactiva integrada de circuito integrado de uma plataforma microfluidic,” disse Arion Chatziioannou do co-investigador, um professor do UCLA da farmacologia molecular e médica.

In vitro o radioassay microfluidic resultante da quinase melhora a eficiência da reacção, comparada com os ensaios padrão, e pode ser processado muito em menos tempo. Esta maior eficiência, acoplada com a sensibilidade alta da beta câmera, reduz a quantidade de pilha de amostra entrada por dois a três ordens de grandeza, comparados com os ensaios convencionais e 96 bons. O ensaio inclui uma etapa do immunocapture da quinase para aumentar a especificidade para a quinase do interesse.

“Para conseguir o ensaio da quinase trabalhar em um ambiente microfluidic, nós necessários para desenvolver protocolos novos e reagentes para grânulos eficientemente de manipulação da captação da quinase do contínuo-apoio usando válvulas microfluidic da armadilha-e-liberação,” disse o co-investigador Hsian-Rong Tseng, um professor do UCLA da farmacologia molecular e médica.

A “Integração da beta câmera de circuito integrado permite que os pesquisadores monitorem o ensaio no tempo real, que provou útil durante nossa revelação e teste do protocolo,” disse o Colmilho de Cong, aluno diplomado principal no projecto. “A plataforma integrada microfluidic e da imagem lactente abre possibilidades novas e torna a miniaturização de muitos bio-ensaios radioactividade-baseados comuns ao reino microfluidic possível.”

“Com a integração da câmera compacta, o ensaio microfluidic do formato tem o potencial ser tornado a banco-parte superior barata, unidades autônomas,” disse o companheiro pos-doctoral Nam Vu do UCLA, que conduziu a revelação da imagem lactente.

“Tomado junto, a entrada reduzida da amostra exigida, o tempo diminuído do ensaio, e digital - a reprodutibilidade controlada do radioassay microfluidic da quinase da equipe facilita a experimentação directa nas amostras clínicas que são preciosas ou perecíveis,” disse o companheiro pos-doctoral Yanju Wang do UCLA, que conduziu o projecto da rede dos componentes microfluidic que executam o ensaio.

As experiências Futuras desenvolverão condições reprodutíveis da coleção e da medida da amostra para amostras pacientes preliminares.

Outras aplicações podiam incluir o perfilamento de amostras modelo pacientes e animais para sua sensibilidade da droga do quinase-inibidor, ou a medida da actividade da quinase das células estaminais, das células estaminais de cancro e de outras pilhas imunes raras.

Source: http://www.newsroom.ucla.edu/

Last Update: 11. January 2012 19:45

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