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Posted in | Microscopy

La Microscopia de SEEC Proporciona a la Información Inesperada Sobre el Comportamiento de Lípidos Etiqueta

Published on September 26, 2011 at 11:25 PM

Un grupo de investigación del Instituto de Tecnología de Karlsruhe (CONJUNTO) en Alemania señala en Langmuir cómo la microscopia de SEEC se puede utilizar para proporcionar a un decorado plausible en cuanto al comportamiento de lípidos etiqueta en una superficie.

Esta nueva técnica, sobre la base del uso de la nueva generación de diapositivas del microscopio - designadas las Resacas - lleva a la visualización directa de muestras nanometric a través de un microscopio óptico convencional. Además, los recientes desarrollos activan el estudio topográfico completo de muestras nanometric con un instrumento óptico dedicado.

De múltiples capas de los Lípidos observada por microscopia de SEEC.

La Pluma Nanolithography del Declive (DPN) se ha mostrado para ser una herramienta potente para la generación de modelos superficiales biológicamente activos. Las Moléculas se entregan de una punta del AFM a una superficie sólida vía el transporte capilar, haciendo DPN una herramienta potencialmente útil para la elaboración de los dispositivos functionalised del nanoscale. Debido al área revestida grande, el control de calidad sistemático de modelos preparados sigue siendo difícil. La Microscopia Atómica de la Fuerza (AFM) no es práctica para la investigación del área de la extra grande mientras que la microscopia de fluorescencia (FM) puede causar la degradación fotoquímica y la adición de antenas fluorescentes es necesaria que la fuerza tiene efectos secundarios indeseados sobre el sistema.

La microscopia Elipsométrica Aumentada Superficie (SEEC) del Contraste se realiza conjuntamente con las diapositivas especiales del microscopio (Nanolane) las propiedades de contraste-aumento de esa pieza de convicción, que permite visualizar las estructuras nanometric (hacia abajo a 0.3nm) con un microscopio óptico “estándar”. Esta técnica no requiere absolutamente ningún tratamiento previo tal como etiqueta. La microscopia de SEEC se beneficia de todas las características ópticas de la microscopia: proyección de imagen en tiempo real; amplia gama de campos visuales (a partir del 70µm de los x 50µm al ² de varios milímetros); la capacidad de realizar estudios en líquido para nombrar pero algunos. Además de eso, algunos recientes desarrollos ahora permiten la conversión de una 2.a imagen de SEEC en una correspondencia 3D para los estudios topográficos completos (extracción del perfil, mediciones de la altura del paso de progresión, tosquedad…). La exactitud de las mediciones (0.3nm) es gracias garantizados a los patrones certificados de la calibración (del Instituto de PTB, Alemania) y a los procedimientos de la ISO 17025.

Recientemente, un grupo de investigación del Instituto de Tecnología de Karlsruhe (CONJUNTO) (Alemania) llevado por el Dr. Hirtz ha propuesto un nuevo modelo estructural de la membrana del lípido que empilaba combinando la información a partir de 3 técnicas microscópicas incluyendo microscopia de SEEC. Pilas de la Membrana preparadas con 20 mol de % de la mezcla del Casquillo PE* de DNP al DOPC ** el portador es estudiado por el AFM, FM y SEEC. El *** del PE de Liss Rhod se utiliza como molécula fluorófora para el análisis de FM.

Mientras Que los estudios topográficos del AFM y de SEEC indican tres diversos niveles de la pila de la membrana elaboraron por DPN, los espesores determinados por el AFM y SEEC concluyen que la primera capa es una capa monomolecular mientras que las segundas y terceras capas son bilayers. Asombrosamente, FM no visualiza más arriba solamente una intensidad más inferior de la fluorescencia para el tercer nivel. La intensidad de la Fluorescencia casi cae al nivel obtenido para una única capa monomolecular y es cerca de 3,5 veces más bajo que preveído. El grupo del Dr. Hirtz propone dos hipótesis para explicar este fenómeno que ocurra para un de alto nivel de la mezcla del PE del Casquillo de DNP: (1) un enriquecimiento de DNP CapPE en y bajo tercera capa con la intensidad fluorescente disminuida debida agotó la concentración del PE de Liss Rhod o (2) un aumento en la concentración del PE de Liss Rhod en y bajo tercer causar de la capa autoextintor del fluoróforo.

El Decorado (1) se considera el más plausible. En la temperatura ambiente, el PE del Casquillo de DNP está en un estado del gel y DOPC y Liss Rhod están encima de su temperatura de transición respectiva, las altas cantidades de mezcla con el PE del Casquillo de DNP deben llevar a la separación de fase de dominios del PE del Casquillo del gel-estado DNP, mientras que el uid-estado DOPC del fl y el PE de Liss Rhod deben estar de una mejor compatibilidad en la temperatura ambiente.

Además, comparar el espesor óptico obtenido por microscopia de SEEC con el espesor físico de mediciones del AFM proporciona a la información sobre el Índice de refracción de la diversa capa de la pila de la membrana. El Índice de refracción de la primera (mono) capa se determina para ser más alto que los de los bilayers del lípido (en segundo lugar y las terceras capas). La subida de la compacticidad de la capa de una capa monomolecular con respecto al de un bilayer aparece ser una explicación posible para este resultado.

Aunque la microscopia del uorescence del fl pueda acelerar el cribado después del paso de progresión de proceso litográfico, puede también llevar a las interpretaciones en el caso de las estructuras finas con la alta mezcla de pastas funcionales según lo observado en este estudio. La microscopia de SEEC hace el uso de las moléculas fluorescentes de la antena insustancial, que pudieron venir en con certeza aplicaciones prácticas. Como el AFM, la microscopia de SEEC puede realizar mediciones del espesor pero sin la limitación para la investigación lateral. Combinar ambas técnicas es una manera elegante de estimar los índices ópticos de materiales desconocidos y de ganar la información sobre algunas de sus propiedades físicas tales como densidad.
Los últimos progresos en microscopia de SEEC están conducto por Nanolane.

Referencias:
El PE del Casquillo del *DNP: hexanoyl de 1,2 dipalmitoyl-sn-glycero-3-phos-phoethanolamine-N- [6 [(2,4-dinitrophenyl) amino]])
** DOPC: 1,2 dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine
El PE de Liss Rhod del ***: 1,2 dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N- (rhodamina B del lissamine sulfonyl)

Last Update: 12. January 2012 12:50

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