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Posted in | Microscopy

La Microscopie de SEEC Fournit des Informations Inattendues Au Sujet du Comportement des Lipides Étiquetés

Published on September 26, 2011 at 11:25 PM

Un organisme de recherche de l'Institut de Technologie de Karlsruhe (TROUSSE) en Allemagne enregistre dans Langmuir comment la microscopie de SEEC peut être employée pour fournir un scénario plausible pour le comportement des lipides étiquetés sur une surface.

Cette technique neuve, basée sur l'utilisation du rétablissement neuf des guides de microscope - désignés sous le nom des Ressacs - mène à la visualisation directe des échantillons nanometric par un microscope optique conventionnel. De plus, les développements récents activent l'étude topographique complète des échantillons nanometric avec un instrument optique dédié.

Multicouche de Lipides observé par microscopie de SEEC.

Le Crayon Lecteur Nanolithography d'Immersion (DPN) s'est avéré un puissant outil pour le rétablissement des configurations extérieures biologiquement actives. Des Molécules sont livrées d'une extrémité d'AFM à une surface solide par l'intermédiaire du transport capillaire, effectuant à DPN un outil potentiellement utile pour l'élaboration des dispositifs functionalised de nanoscale. En Raison du grand domaine couvert, le contrôle qualité systématique des configurations préparées demeure difficile. La Microscopie Atomique de Force (AFM) n'est pas pratique pour l'examen critique de zone d'extra large tandis que la microscopie à fluorescence (FM) peut entraîner la dégradation photochimique et l'ajout des sondes fluorescentes sont nécessaire que la force exercent des effets secondaires non désirés sur le système.

La microscopie Ellipsométrique Améliorée Extérieure (SEEC) de Contraste est effectuée en combination avec les guides spéciaux de microscope (Nanolane) les propriétés contraste-augmentantes de ce document, qui permet pour concevoir les structures nanometric (vers le bas à 0.3nm) avec un microscope optique « normal ». Cette technique n'exige absolument aucun traitement préparatoire tel que l'écriture de labels. La microscopie de SEEC tire bénéfice de toutes les caractéristiques techniques optiques de microscopie : représentation en temps réel ; large gamme de champs de vision (de 70µm x de 50µm au ² de plusieurs millimètres) ; la capacité de réaliser des études dans le liquide pour nommer mais quelques uns. En plus de cela, quelques développements récents tiennent compte maintenant de la conversion d'une 2D image de SEEC dans un plan 3D pour des études topographiques complètes (extraction de profil, mesures de hauteur de phase, rugosité…). L'exactitude des mesures (0.3nm) est grâce garantie aux normes certifiées d'étalonnage (d'Institut de PTB, Allemagne) et aux procédures d'OIN 17025.

Récent, un organisme de recherche d'Institut de Technologie de Karlsruhe (TROUSSE) (Allemagne) abouti par M. Hirtz a proposé un modèle structurel neuf de membrane de lipide empilant en combinant l'information de 3 techniques microscopiques comprenant la microscopie de SEEC. Piles de Membrane préparées avec 20 moles de % de mélange du Bouchon PE* de DNP au DOPC ** le porteur sont étudiés par l'AFM, le FM et le SEEC. Le *** de PE de Liss Rhod est utilisé comme molécule fluorophore pour l'analyse de FM.

Tandis Que les études topographiques d'AFM et de SEEC indiquent trois niveaux différents de la pile de membrane ont élaboré par DPN, les épaisseurs déterminées par l'AFM et le SEEC concluent que la première couche est une couche unitaire attendu que les deuxièmes et troisième couches sont des bilayers. Étonnant, FM n'affiche pas plus haut mais intensité inférieure de fluorescence pour le niveau. L'intensité de Fluorescence chute presque au niveau obtenu pour une couche unitaire unique et est environ 3,5 fois plus bas que prévu. Le groupe de M. Hirtz propose deux hypothèses pour expliquer ce phénomène qui se produit pour un de haut niveau du mélange du PE de Bouchon de DNP : (1) un enrichissement de DNP CapPE dans et sous la troisième couche avec l'intensité fluorescente diminuée due a épuisé la concentration en PE de Liss Rhod ou (2) une augmentation de concentration en PE de Liss Rhod dans et sous troisième entraîner de couche autotrempant du fluorophore.

Le Scénario (1) est considéré le plus plausible. À la température ambiante, le PE de Bouchon de DNP est dans une condition de gel et DOPC et Liss Rhod sont au-dessus de leur température de passage respective, des montants élevés de mélange avec du PE de Bouchon de DNP devraient mener à la séparation de phase des domaines de PE de Bouchon du gel-état DNP, alors que l'uid-état DOPC de fl et le PE de Liss Rhod devraient être d'une meilleure compatibilité à la température ambiante.

En Outre, comparer l'épaisseur optique obtenue par microscopie de SEEC à l'épaisseur matérielle des mesures d'AFM fournit des informations au sujet de l'Indice de réfraction de la couche différente de pile de membrane. L'Indice de réfraction de la première couche (mono) est déterminé pour être plus élevé que ceux des bilayers de lipide (en second lieu et des troisième couches). L'augmentation de la compacité de couche d'une couche unitaire par rapport à cela d'un bilayer semble être une explication possible pour ce résultat.

Bien Que la microscopie d'uorescence de fl puisse accélérer le procédé de dépistage après la phase de processus lithographique, elle peut également mener aux erreurs d'interprétation dans le cas des structures minces avec le mélange élevé des composés fonctionnels comme observé dans cette étude. La microscopie de SEEC rend l'utilisation des molécules fluorescentes de sonde inutile, qui pourraient venir dans pratique pour certaines applications. Comme l'AFM, la microscopie de SEEC peut exécuter des mesures d'épaisseur mais sans limitation pour l'examen critique transversal. La Combinaison de les deux techniques est une voie élégante d'estimer les incréments optiques des matériaux inconnus et d'obtenir des informations sur certaines de leurs propriétés physiques telles que la densité.
Les derniers développements sur la microscopie de SEEC sont conduits par Nanolane.

Références :
PE de Bouchon de *DNP : hexanoyl de 1,2 dipalmitoyl-sn-glycero-3-phos-phoethanolamine-N- [6 [(2,4-dinitrophenyl) aminé]])
** DOPC : 1,2 dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine
PE de Liss Rhod de *** : 1,2 dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N- (rhodamine B de lissamine sulfonyle)

Last Update: 12. January 2012 13:10

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