ダイナミックな光散乱の Malvern 著製造者データを使用して蛋白質のサイズの測定

カバーされるトピック

背景

リゾチーム

使用される装置

サンプル準備および測定

結果

サイズ

分散の強度を使用して結果の確認

結論

背景

小さい測定は不完全に解決の分子を分散させてダイナミックな光散乱システムのための挑戦いままで常にでした。 以前最終的な感度を得ることはこのタイプの測定に専用されている専門にされた光学セットアップをか複雑さおよび費用のために不評である強力なレーザーソースを必要としました。 このアプリケーションノートは Malvern HPPS がどのようにこれらの感度に達し、広い応用範囲を維持できるか示します。

リゾチーム

リゾチームは人間破損および唾液で見つけられる酵素で細菌のセルを殺すために責任があります。 それは 1922 年にアレクサンダー・フレミングによって検出され、最初の抗生物質として知られるようになりました。

それはコンパクト、ほぼ球形であると見つけられたように最初の蛋白質構造を定めてもらうためにでした。 小型および容易なアベイラビリティと共にこの事実はリゾチームにダイナミックな光散乱システムの感度を調査するための優秀な選択をします。

使用される装置

Malvern HPPS。

リゾチーム (メルク)、 0.1 のモルのナトリウムアセテートバッファ (pH 4.25)、使い捨て可能なプラスチックスポイト、 0.2 のμm のスポイトフィルター、正方形のガラスキュヴェット。

サンプル準備および測定

サンプルの 15 だけμg が測定に必要となるが、正確な集中が準備されることを可能にするように 100 mg のリゾチームは 1000 の ml のナトリウムアセテートバッファで分解しました。 0.2 ml はきれいで、ほこりのないガラスキュヴェットに 0.2 のμm のスポイトフィルターでフィルタに掛けました。 これは 0.1mg/ml のリゾチームの単量体の集中を構成します。

ガラスキュヴェットはのために平衡する単位および温度がに 300s 測定が行われた 3 分前に挿入されました。

結果

サイズ

図表の相関関数は下のデータがリゾチームの中間のサイズそして polydispersity を計算するには十分によいサイズ分布の徴候は可能ですことを示し。

リゾチームのサンプルの粒度分布。

図 1. リゾチームのサンプルの粒度分布。

低い集中にもかかわらず、 4 nm の単量体の直径は優秀な精密とはっきり測定されました。 さらに、そのような小さく、希薄なサンプルと避け非常ににくいの総計はより少しそしてであるためにまた測定可能、これらの総計の多くの貢献測定されました 0.3% でした。

これはそれがリゾチームの 15 μg のサイズを測定することは実行可能であることを示します。

分散の強度を使用して結果の確認

0.1 mg/ml のサンプル集中は確認することができ推論によって値とこの集中を比較することによって認可された結果はサンプルの分散の強度から計算しました。 解決の検出された光子のカウントのレートは 29 の kcps (たくさんの毎秒カウント) として測定されました。 リゾチームの単量体による分散として 8.9 の kcps を与える分散剤からの分散は 20.1 の kcps として測定されました。 私達は Rayleigh の知られていた比率、この場合 220 の kcps のカウントのレートを与えたトルエンの標準の分散の強度に目盛りを付けてもいいです。 リゾチームのための dn/dc、および 14,400 ドルトンの単量体 MW を 632.8 nm の波長で 0.2 として取って、集中はこのプロシージャの 5% の重量を量る正確さで十分できる範囲にあった 0.102 mg/ml であるために計算されました。

結論

Malvern HPPS はここに示されるように非常に低い集中の小粒子の DLS の測定に完全に、適します。 低いカウントのレートにもかかわらず、 nm からのμm の政体への完全な粒度の範囲は総計のための単量体サイズそしてスクリーンを測定するのに器械が使用することができることを保障する単一の測定でアクセス可能です。

この情報は Malvern の器械によって提供される材料から供給され、見直され、そして適応させて。

このソースのより多くの情報のために、 Malvern の器械を訪問して下さい

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