Temas Abordados
Fundo
Crescimento de cristais de proteínas
O segundo coeficiente virial
Medição do segundo coeficiente virial
O segundo coeficiente virial e Crescimento de Cristais Optimal
Determinação problemas associados do segundo coeficiente virial
Espalhamento de luz dinâmico
Espalhamento de luz dinâmico e Determinação de Tamanho de Partículas
Espalhamento de luz dinâmico e Agregação
Espalhamento de luz dinâmico e Triagem de cristalização
EndoPG eu Triagem
Luz dinâmica de espalhamento e EndoPG eu Triagem
Zetasizer Nano Sistema
Fundo
No início de 1990, espalhamento de luz dinâmico (DLS) foi introduzido como uma ferramenta de triagem para cristalografia. Durante a última década DLS tornou-se amplamente aceito nessa função, e dinâmica de espalhamento de luz são instrumentos rotineiramente integrado laboratórios de cristalografia de raios X. Um equívoco comum no entanto, é que DLS pode dizer um que as amostras são susceptíveis de produzir cristais. Na prática, DLS é mais apropriadamente usado como uma ferramenta para a triagem para fora amostras que não são susceptíveis de produzir cristais. Neste artigo, vamos abordar a sutil diferença nestes pontos, e examinar o valor das técnicas de espalhamento de luz como ferramentas de triagem de cristal.
Crescimento de cristais de proteínas
A taxa etapa determinante na resolução de estruturas cristalinas é identificar as condições ótimas para o crescimento de cristais de alta qualidade. Há uma infinidade de reagentes para a geração do "sopas" de que os cristais de alta qualidade são cultivadas. No entanto, todas as receitas tendem a ser específicos de proteínas, e ao mesmo tempo modificando um mix favorito para atender a uma nova proteína-alvo é a abordagem padrão, na maioria das vezes, a sorte desempenha um papel significativo na geração de cristais de proteínas de alta qualidade.
O segundo coeficiente virial
O segundo coeficiente virial (A 2) é uma propriedade termodinâmica que descreve a força da interação entre a proteína eo solvente. Para a proteína-solvente sistemas com A 2> 0, a proteína "gosta do solvente" mais de si mesma e tende a ser solúvel. Quando A 2 = 0, o solvente é descrito como um solvente teta, indicando que a força de interação partícula-solvente é equivalente a partícula-partícula força da interação. Quando A 2 <<0, a proteína "gosta-se" muito mais do que o solvente, e tende a agregar em precipitar amorfo. A 2, quando é apenas ligeiramente negativa no entanto, as condições são ideais para o crescimento de cristais de proteínas em concentrações de saturação (Figura 1).
Figura 1. Cristal taxa de sucesso de crescimento em função do coeficiente virial 2 (A 2).
Medição do segundo coeficiente virial
O coeficiente de virial segundo é tipicamente medido utilizando espalhamento de luz estático (SLS) técnicas. A expressão Rayleigh usado para descrever o espalhamento de luz de partículas menores que o comprimento de onda da luz incidente é dada na Equação 1, onde K é uma constante óptico, C é a concentração de partículas, M é o peso médio peso molecular, A 2 é o coeficiente segundo virial, e Re é a razão de Rayleigh espalhada a intensidade da luz incidente.