Caracterización de Materiales Biocrystalline con microespectroscopía Absorbancia

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Tabla de contenidos

Introducción

Microespectroscopía UV se utiliza en el estudio de las propiedades ópticas de los cristales individuales y también para el control de la calidad del crecimiento de cristales. UV-visible microespectroscopía gama es una técnica clave para el análisis individual de cristales de proteína. En la actualidad, los cristales de proteínas se utilizan en la liberación controlada de fármacos, la biología estructural y el diseño de fármacos, y bioseparaciones.

Para la localización, clasificación y análisis de materiales biocrystalline de una manera rápida, fácil y no destructiva, Tecnologías CRAIC ofrece la microspectrophotometer 20/20 PV .

Experimento

En esta serie de experimentos, cuatro muestras diferentes fueron estudiadas a través microespectroscopía absorbancia. Las muestras 1, 2, 3 y 4 compuesto por cristales de ADN, los cristales de flavoproteína, los cristales de sal en la solución de Co, y cristales de proteínas de ADN, respectivamente. El PV 20/20 se ha configurado para transmisión y fluorescencia para esta serie de experimentos. El objetivo utilizado fue del tipo Schwarzchild 15x, ya que tiene una muy larga distancia de trabajo y la coherencia en todo el espectro UV completo, visible y NIR regiones.

De cada muestra, 200 l de solución fue tomada y colocada en una placa de 96 pocillos Costar, que presenta buenas características de transmisión de los rayos UV. La ubicación de un cristal se identificó y el sistema se ha optimizado el uso de iluminación de Kohler. Una referencia fue correr al lado de los cristales que antes de obtener el espectro del cristal. Por lo tanto, las características espectrales de la placa, así, la solución y el instrumento se eliminan. El espectro de final será de sólo el cristal.

Resultados

Los espectros de absorción de las cuatro muestras se midieron (ver Figura 1). Las muestras 1, 2, 3 y 4 fueron calificados como el ADN de cristal, flavoproteína, cristales de sal en la solución, y el cristal de ADN / proteínas, respectivamente. Todos los espectros, excepto la de la sal mostraron un pico de absorbancia a 286 nm. El cristal de ADN mostraron un pico muy intenso, lo que indica una alta densidad óptica. Además, este fue el único pico para el cristal de ADN.

Figura 1. Superposición de los espectros de absorción de las muestras 4.1.

La flavoproteína exhiben picos en longitudes de onda de 354, 414, 442 y 446 nm durante el examen inicial. Sin embargo, durante los exámenes repetidos, el espectro de flavoproteína mostró algunos cambios (ver Figura 2). El espectro del cristal de ADN / proteína mostraron un pico de 352 nm.

Figura 2. Superposición de los espectros de absorción flavoproteína de cristal en la exposición a corto y largo plazo con el oxígeno.

Las imágenes de cada uno de los cristales también se han obtenido (ver Figura 3). El cuadrado negro indica la abertura de entrada de la microspectrophotometer, que fue de 15x15 micras.

Figura 3. Imágenes de Cristal. Las agujas del reloj desde la parte superior izquierda: el cristal de ADN, el cristal flavoproteína después de haber comenzado a disolver los cristales de sal en la solución, y el cristal de ADN / proteína.

Conclusiones

UV-visible espectros de absorción de un cristal de ADN, un cristal flavoproteína, un cristal de sal, y un cristal de ADN / proteínas se obtuvieron utilizando la microspectrophotometer 20/20 PV . Todos los espectros pueden ser fácilmente distinguidos y las densidades ópticas también fueron comparables. Además, el cambio en el espectro de flavoproteína se controló también con el PV 20/20 .