ダイナミックな光散乱の Malvern 著製造者データを使用して蛋白質のサイズの測定

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カバーされるトピック

背景

リゾチーム

使用される装置

サンプル準備および測定

結果

サイズ

分散の強度を使用して結果の確認

結論

背景

小さい測定は不完全に解決の分子を分散させてダイナミックな光散乱システムのための挑戦いままで常にでした。 以前最終的な感度を得ることはこのタイプの測定に専用されている専門にされた光学セットアップをか複雑さおよび費用のために不評である強力なレーザーソースを必要としました。 このアプリケーションノートは Malvern HPPS がどのようにこれらの感度に達し、広い応用範囲を維持できるか示します。

リゾチーム

リゾチームは人間破損および唾液で見つけられる酵素で細菌のセルを殺すために責任があります。 それは 1922 年にアレクサンダー・フレミングによって検出され、最初の抗生物質として知られるようになりました。

それはコンパクト、ほぼ球形であると見つけられたように最初の蛋白質構造を定めてもらうためにでした。 小型および容易なアベイラビリティと共にこの事実はリゾチームにダイナミックな光散乱システムの感度を調査するための優秀な選択をします。

使用される装置

Malvern HPPS。

リゾチーム (メルク)、 0.1 のモルのナトリウムアセテートバッファ (pH 4.25)、使い捨て可能なプラスチックスポイト、 0.2μm のスポイトフィルター、正方形のガラスキュヴェット。

サンプル準備および測定

サンプルの 15μg だけ測定に必要となるが、正確な集中が準備されることを可能にするように 100mg リゾチームは 1000ml ナトリウムアセテートバッファで分解しました。 0.2ml はきれいで、ほこりのないガラスキュヴェットに 0.2 のμm のスポイトフィルターでフィルタに掛けました。 これは 0.1mg/ml のリゾチームの単量体の集中を構成します。

ガラスキュヴェットはのために平衡する単位および温度がに 300s 測定が行われた 3 分前に挿入されました。

結果

サイズ

図表の相関関数は下のデータがリゾチームの中間のサイズそして polydispersity を計算するには十分によいサイズ分布の徴候は可能ですことを示し。

リゾチームのサンプルの粒度分布。

図 1. リゾチームのサンプルの粒度分布。

低い集中にもかかわらず、 4nm の単量体の直径は優秀な精密とはっきり測定されました。 さらに、そのような小さく、希薄なサンプルと避け非常ににくいの総計はより少しそしてであるためにまた測定可能、これらの総計の多くの貢献測定されました 0.3% でした。

これはそれがリゾチームの 15μg のサイズを測定することは実行可能であることを示します。

分散の強度を使用して結果の確認

0.1 mg/ml のサンプル集中は確認することができ推論によって値とこの集中を比較することによって認可された結果はサンプルの分散の強度から計算しました。 解決の検出された光子のカウントのレートは 29kcps (たくさんの毎秒カウント) として測定されました。 リゾチームの単量体による分散として 8.9 の kcps を与える分散剤からの分散は 20.1 の kcps として測定されました。 私達は Rayleigh の知られていた比率、この場合 220kcps のカウントのレートを与えたトルエンの標準の分散の強度に目盛りを付けてもいいです。 リゾチームのための dn/dc、および 14,400 ドルトンの単量体 MW を 632.8nm の波長で 0.2 として取って、集中はこのプロシージャの 5% の重量を量る正確さで十分できる範囲にあった 0.102mg/ml であるために計算されました。

結論

Malvern HPPS はここに示されるように非常に低い集中の小粒子の DLS の測定に完全に、適します。 低いカウントのレートにもかかわらず、 nm からのμm の政体への完全な粒度の範囲は総計のための単量体サイズそしてスクリーンを測定するのに器械が使用することができることを保障する単一の測定でアクセス可能です。

ソース: 「低い集中の解決、 0.1mg/mL のリゾチームの単量体の蛋白質の測定」、アプリケーションノート

このソースのより多くの情報のために Malvern の器械株式会社 (イギリス) または Malvern の器械 (米国) を訪問して下さい。

Date Added: Apr 14, 2005 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 01:30

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