小さ な測定、溶液中の悪い散乱分子は常に動的光散乱システムの課題となっている。過去の究極の感度を得ることはこの種の測定、またはその複雑とコストの人気のない強力なレーザー光源に特化した光学アップセットを必要としています。このアプリケーションノートでは、方法を示しています。 マルバーン HPPSは、これらの感度を達成し、アプリケーションの広い範囲を維持することができます。 リゾチーム リゾチームは、人間の涙と唾液で検出された酵素であり、細菌細胞を殺すために責任があります。それは1922年にアレクサンダーフレミングによって発見され、最初の抗生物質として知られるようになったていた。 コンパクトとほぼ球状であることが判明したとして、それは、その構造が決定されている最初の蛋白質であった。その小さなサイズと入手の容易さとともに、この事実は、動的光散乱システムの感度を調査するための優れた選択肢をリゾチームです。 使用済み機器 マルヴァーン HPPS。 リゾチーム（MERCK）、0.1モルのナトリウム-酢酸緩衝液（pH 4.25）、使い捨てのプラスチック製の注射器、0.2μmのシリンジフィルター、正方形のガラスキュベット。 サンプル調製と測定 サンプルの唯一の15μgを調製するための正確な濃度を有効にするために、測定に必要ですが、100mgのリゾチームは、千ミリリットルナトリウム-酢酸緩衝液に溶解した。 0.2ミリリットルは、清潔で埃のないガラスキュベットに0.2μmのシリンジフィルターで濾過した。これは、0.1mg/mlのリゾチーム単量体の濃度を構成している。 ガラスキュベットは、ユニットに挿入し、温度が300秒の測定が実行される前に3分間平衡させた。 結果 サイズ 下の図の相関関数は、データが平均サイズとリゾチームの多分散性を計算するために十分であることを示し、粒径分布の表示が可能です。  | 図1 リゾチームのサンプルの粒度分布。 |
低濃度にもかかわらず、4nmの単量体の直径は、明らかに優れた精度で測定した。さらに、そのような小さなサンプルの希釈を避けるために非常に困難な凝集体は、同様に、これらの凝集体の質量の寄与は少なく、0.3％であると測定された測定可能であった。 これは、リゾチームの15μgの大きさを測定するために可能であることを示します。 散乱強度を使用して結果の確認 は0.1 mg / mlの試料濃度が確認され、推論によって、結果は試料の散乱強度から計算した値で、この濃度を比較することによって検証することができます。ソリューションの検出された光子のカウントレートは29kcps（秒当たりのカウント数の何千人もの）として測定した。分散剤からの散乱は、リゾチームの単量体による散乱として8.9計数率を与える20.1計数率として測定した。我々は220kcpsの計数率を与えたこの場合トルエン、で、既知のレイリー比の標準で散乱強度を校正することができます。 632.8nmの波長で0.2とリゾチームのdn / dcをとり、14400ダルトンのモノマーの分子量、濃度は、この手順では5％の計量精度の範囲内だった0.102mg/ml、と計算された。 結論 マルバーン HPPSは完全にここに示すように、非常に低い濃度で小さな粒子についてDLS測定に最適です。低計数率にもかかわらず、nmからμmの政権への完全な粒径範囲は、測定器の集合体の単量体のサイズと画面を測定するために使用できることを保証する、単一の測定、にアクセス可能です。 |