Medida do Tamanho da Proteína Usando a Dispersão de Luz Dinâmica, Dados do Fornecedor por Malvern

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Assuntos Cobertos

Fundo

Lysozyme

Equipamento Usado

Preparação e Medida da Amostra

Resultados

Tamanho

Confirmação do Resultado Usando a Intensidade da Dispersão

Conclusão

Fundo

Medir pequena, deficientemente dispersando moléculas na solução foi sempre um desafio para sistemas dinâmicos da dispersão de luz. Obter a sensibilidade final no passado exigiu uma instalação óptica especializada dedicada a este tipo de medida, ou uma fonte de laser poderosa que fosse impopular devido a seus complexidade e custo. Esta nota de aplicação mostra como o Malvern HPPS pode alcançar estas sensibilidades e manter uma vasta gama de aplicações.

Lysozyme

O Lysozyme é uma enzima encontrada em rasgos humanos e em saliva, e é responsável para matar pilhas bacterianas. Foi descoberto por Alexander Fleming em 1922, e tornou-se conhecido como o primeiro antibiótico.

Era a primeira proteína para ter sua estrutura determinada, como foi encontrado para ser compacto e quase esférico. Este facto junto com seus tamanho pequeno e disponibilidade fácil faz a lysozyme uma escolha excelente para investigar a sensibilidade de um sistema dinâmico da dispersão de luz.

Equipamento Usado

Malvern HPPS.

Lysozyme (MERCK), 0,1 amortecedores do Sódio-Acetato do molar (pH 4,25), seringa plástica descartável, filtro da seringa de 0.2μm, cubeta de vidro quadrada.

Preparação e Medida da Amostra

Embora somente 15μg da amostra fosse exigido para uma medida, para permitir uma concentração exacta de ser preparado, o Lysozyme 100mg foi dissolvido no amortecedor do Sódio-Acetato 1000ml. 0.2ml foi filtrado através de uns 0,2 filtros da seringa do μm em uma cubeta de vidro limpa, livre de poeira. Isto constitui uma concentração do monómero do Lysozyme de 0.1mg/ml.

A cubeta de vidro foi introduzida na unidade e na temperatura permitidas equilibrar para 3 minutos antes que uma medida 300s estêve executada.

Resultados

Tamanho

A função de correlação no diagrama abaixo indica que os dados são bons bastante calcular o tamanho e a polidispersidade médios do Lysozyme, e uma indicação da distribuição de tamanho é possível.

Distribuição de tamanho da Partícula da amostra do lysozyme.

Figura 1. distribuição de tamanho da Partícula da amostra do lysozyme.

Apesar da baixa concentração, o diâmetro do monómero de 4nm foi medido claramente com precisão excelente. Além, os agregados, que são extremamente difíceis de evitar com tais amostras pequenas e diluídas, eram mensuráveis também, a contribuição em massa destes agregados foram medidos para ser menos então 0,3%.

Isto indica que é praticável medir o tamanho de 15μg do Lysozyme.

Confirmação do Resultado Usando a Intensidade da Dispersão

A concentração da amostra de 0,1 mg/ml pode ser confirmada, e pela inferência o resultado validado comparando esta concentração com o valor calculou da intensidade da dispersão da amostra. A taxa detectada da contagem do fotão da solução foi medida como 29kcps (Milhares de por segundo das contagens). A dispersão do dispersant foi medida como os kcps 20,1, que dá 8,9 kcps como a dispersão devido ao monómero do Lysozyme. Nós podemos calibrar a intensidade da dispersão com um padrão da Relação conhecida de Rayleigh, neste caso o tolueno, que deu uma taxa da contagem de 220kcps. Tomando o dn/dc para o Lysozyme como 0,2 em um comprimento de onda de 632.8nm, e um monómero Mw de 14.400 Dalton, a concentração foi calculada para ser 0.102mg/ml, que estava bem dentro da precisão de peso de 5% neste procedimento.

Conclusão

O Malvern HPPS é serido perfeitamente para medidas de DLS em partículas pequenas mesmo na concentração muito baixa, como demonstrado aqui. Apesar da baixa taxa da contagem, a escala completa do tamanho de partícula do nanômetro ao regime do μm é acessível em uma única medida, que se assegure de que o instrumento possa ser usado para medir o tamanho e a tela do monómero para agregados.

Source: “Medida das Proteínas na Solução na Baixa Concentração, Monómero do Lysozyme em 0.1mg/mL”, Nota de Aplicação perto

Para obter mais informações sobre desta fonte visite por favor Instrumentos Ltd de Malvern (REINO UNIDO) ou Instrumentos de Malvern (EUA).

Date Added: Apr 14, 2005 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 01:43

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