蛋白质范围的评定使用动态光散射,供应商数据的由 Malvern

包括的事宜

背景

溶菌酶

使用的设备

范例准备和评定

结果

范围

结果的确认使用分散强度的

结论

背景

评定小,拙劣地分散在解决方法的分子总是动态光散射系统的一个挑战。 获得最终区分从前要求了一个专门化的光学设置投入此种评定或者是不得人心的由于其复杂和费用的一个强大的激光源。 此应用注解显示 Malvern HPPS 如何可能到达这些区分和维护各种各样的应用。

溶菌酶

溶菌酶是在人的眼泪和唾液找到的酵素,并且对杀害细菌细胞负责。 亚历山大 Fleming 发现在 1922年它并且出名作为第一抗生素。

它是第一蛋白质安排其结构被确定,象发现紧凑和接近球状的。 以及其小型和容易的可用性的此情况做出溶菌酶调查的一个动态光散射系统的区分一个非常好的选择。

使用的设备

Malvern HPPS。

溶菌酶 (默克), 0.1 槽牙钠醋酸盐缓冲 (酸碱度 4.25),一次性塑料注射器, 0.2 μm 注射器补白,方形玻璃小试管。

范例准备和评定

虽然仅 15 范例μg 对于评定是必需的,使准确浓度准备, 100 毫克溶菌酶在 1000 ml 钠醋酸盐缓冲被溶化。 0.2 ml 通过 0.2 μm 注射器补白被过滤了到一支干净,无灰尘的玻璃小试管。 这构成 0.1mg/ml 的溶菌酶单体含量。

3 分钟,在 300s 评定进行了前,玻璃小试管被插入了到允许的这个部件和这个温度平均为。

结果

范围

在下面的绘制的相关函数表明这个数据是足够好计算溶菌酶的平均范围和多分散性,并且大小分布的表示是可能的。

溶菌酶范例的粒度分布。

图 1. 溶菌酶范例的粒度分布。

尽管低浓度,单体直径 4 毫微米明显地评定了与非常好的精确度。 另外,综合,是非常难避免与这样小和稀释范例,是可测量的,这些综合的质量摊缴被评定是较少然后 0.3%。

这表明是可行的评定 15 溶菌酶μg 的范围。

结果的确认使用分散强度的

0.1 mg/ml 的范例浓度可以被确认,并且由推断验证的这个结果此浓度与这个值比较从这个范例的分散强度计算了。 这个解决方法的检测光子计数费率被评定了作为 29 kcps (千位计数每秒)。 分散从分散剂被评定了作为 20.1 kcps,产生 8.9 kcps 作为分散由于溶菌酶单体。 我们可以校准与已知的 Rayleigh 比例,在这种情况下甲苯标准的分散强度,产生 220 kcps 的计数费率。 采取溶菌酶的 dn/dc 作为 0.2 在波长 632.8 毫微米和单体兆瓦 14,400 多尔顿,浓度被计算是 0.102 mg/ml,是在称的准确性的 5% 内在此程序。

结论

Malvern HPPS 完全适用与在小颗粒的 DLS 评定甚而以非常低浓度,如被展示这里。 尽管低计数费率,从 nm 的充分的颗粒大小范围到μm 政权是可访问的在一个唯一评定,保证仪器可以用于评定单体范围和屏幕综合的。

此信息是来源,复核和适应从 Malvern 仪器提供的材料。

关于此来源的更多信息,请参观 Malvern 仪器。

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