Anticorpos e Estudo de Interacções do Antígeno/Vírus Usando Técnicas Dinâmicas da Dispersão de Luz Dos Instrumentos de Malvern

Assuntos Cobertos

Fundo
     Antígenos e Anticorpos
     Dispersão de Luz Dinâmica para o Tamanho de Partícula de Medição
     Tratar as Partículas Pequenas e as Concentrações Diluídas
Estudo de Caso - Interacções Entre Anticorpos e um Vírus
     Procedimento Experimental
     Resultados
Conclusões

Fundo

Antígenos e Anticorpos

Os Anticorpos (Ab) são proteínas produzidas pelo corpo em resposta à presença de um corpo estrangeiro. Os Antígenos (Ag) são os compostos estrangeiros que incitam a produção de anticorpos. Podem ocorrer livre na solução ou podem ser limitados à superfície das pilhas ou das partículas tais como vírus ou bactérias. Um anticorpo produzido em resposta a um corpo estrangeiro reage com o antígeno para formar um complexo imune (Ab-AG) e é neutralizado conseqüentemente.

Dispersão de Luz Dinâmica para o Tamanho de Partícula de Medição

A dispersão de luz Dinâmica (espectroscopia da correlação do fotão) é uma técnica que possa medir o tamanho das partículas para baixo a 1nm no diâmetro. As Partículas submetem-se em suspensão ao movimento Brownian aleatório. Se estas partículas são iluminadas com um raio laser, a intensidade da luz dispersada flutua em uma taxa que seja dependente do tamanho das partículas. A Análise destas flutuações da intensidade rende a velocidade do movimento Brownian e daqui do tamanho de partícula.

Tratar as Partículas Pequenas e as Concentrações Diluídas

A intensidade da luz dispersada obtida das partículas pequenas ou das amostras que são muito diluídas será insuficiente para medidas repetíveis da cola do PCS usando um laser padrão do Ele-Ne 10mW.

Um método de superar tais problemas é usar um detector de uma eficiência mais alta. O instrumento de Malvern Zetasizer HS contem um fotodiodo da avalancha (APD).

Este detector permite a medida de partículas pequenas e de amostras de baixa concentração sem a necessidade para um laser mais poderoso.

Estudo de Caso - Interacções Entre Anticorpos e um Vírus

Esta nota de aplicação descreve as medidas dinâmicas da dispersão de luz em que a afinidade de dois anticorpos diferentes para uma amostra do vírus pode ser estudada.

Procedimento Experimental

As medidas foram feitas em um Malvern Zetasizer 3000HS em uma temperatura de 25°C. A luz dispersada foi detectada em um ângulo de 90°.

Resultados

Figura 1 mostras as distribuições de tamanho da intensidade obtidas de 3 medidas da repetição de uma amostra de soro que contem anticorpos. As distribuições foram obtidas da análise dos dados com o algoritmo de CONTIN. As distribuições são monomodal com modos máximos em 32nm respectivamente. A afinidade de dois anticorpos diferentes para um vírus foi determinada misturando cada um das amostras do anticorpo com uma amostra do vírus e fazendo medidas rápidas da cola (cada 30 segundos). Figura 2 mostra os diâmetros z-médios (o diâmetro médio baseado na intensidade da luz dispersada) obtidos para as misturas de 2 anticorpos com partículas do vírus em função do tempo decorrido após a mistura. O aumento no diâmetro z-médio resulta da formação do complexo do anticorpo-vírus. O Anticorpo 1 mostra uma afinidade mais alta para o vírus indicado pela inclinação mais íngreme da curva.

Figura 1. distribuições de tamanho da Intensidade obtidas de 3 medidas da repetição de uma amostra de soro que contem anticorpos.

Figura lote de 2.A dos diâmetros z-médios das misturas de 2 anticorpos diferentes com um vírus em função do tempo decorrido após a mistura.

Conclusões

A espectroscopia da correlação do Fotão pode ser usada para medir o tamanho de partículas pequenas. É uma técnica não invasora que possa ser usada para avaliar a afinidade de vários anticorpos para um vírus particular.

Source: O Estudo do Anticorpo: Interacções do Antígeno Usando Técnicas da Dispersão de Luz”, Nota de Aplicação por Instrumentos de Malvern.

Para obter mais informações sobre desta fonte visite por favor Instrumentos Ltd de Malvern (REINO UNIDO) ou Instrumentos de Malvern (EUA).

Date Added: May 3, 2005 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 01:43

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