Anticorpos e Estudo de Interacções do Antígeno/Vírus Usando Técnicas Dinâmicas da Dispersão de Luz

Assuntos Cobertos

Fundo
     Antígenos e Anticorpos
     Dispersão de Luz Dinâmica para o Tamanho de Partícula de Medição
     Tratar as Partículas Pequenas e as Concentrações Diluídas
Estudo de Caso - Interacções Entre Anticorpos e um Vírus
     Procedimento Experimental
     Resultados
Conclusões

Antígenos e Anticorpos

Os Anticorpos (Ab) são proteínas produzidas pelo corpo em resposta à presença de um corpo estrangeiro. Os Antígenos (Ag) são os compostos estrangeiros que incitam a produção de anticorpos. Podem ocorrer livre na solução ou podem ser limitados à superfície das pilhas ou das partículas tais como vírus ou bactérias. Um anticorpo produzido em resposta a um corpo estrangeiro reage com o antígeno para formar um complexo imune (Ab-AG) e é neutralizado conseqüentemente.

Dispersão de Luz Dinâmica para o Tamanho de Partícula de Medição

A dispersão de luz Dinâmica (espectroscopia da correlação do fotão) é uma técnica que possa medir o tamanho das partículas para baixo a 1nm no diâmetro. As Partículas submetem-se em suspensão ao movimento Brownian aleatório. Se estas partículas são iluminadas com um raio laser, a intensidade da luz dispersada flutua em uma taxa que seja dependente do tamanho das partículas. A Análise destas flutuações da intensidade rende a velocidade do movimento Brownian e daqui do tamanho de partícula.

Tratar as Partículas Pequenas e as Concentrações Diluídas

A intensidade da luz dispersada obtida das partículas pequenas ou das amostras que são muito diluídas será insuficiente para medidas repetíveis da cola do PCS usando um laser padrão do Ele-Ne 10mW.

Um método de superar tais problemas é usar um detector de uma eficiência mais alta. O instrumento de Malvern Zetasizer HS contem um fotodiodo da avalancha (APD).

Este detector permite a medida de partículas pequenas e de amostras de baixa concentração sem a necessidade para um laser mais poderoso.

Estudo de Caso - Interacções Entre Anticorpos e um Vírus

Esta nota de aplicação descreve as medidas dinâmicas da dispersão de luz em que a afinidade de dois anticorpos diferentes para uma amostra do vírus pode ser estudada.

Procedimento Experimental

As medidas foram feitas em um Malvern Zetasizer 3000HS em uma temperatura de 25°C. A luz dispersada foi detectada em um ângulo de 90°.

Resultados

Figura 1 mostras as distribuições de tamanho da intensidade obtidas de 3 medidas da repetição de uma amostra de soro que contem anticorpos. As distribuições foram obtidas da análise dos dados com o algoritmo de CONTIN. As distribuições são monomodal com modos máximos em 32nm respectivamente. A afinidade de dois anticorpos diferentes para um vírus foi determinada misturando cada um das amostras do anticorpo com uma amostra do vírus e fazendo medidas rápidas da cola (cada 30 segundos).

Figura 2 mostra os diâmetros z-médios (o diâmetro médio baseado na intensidade da luz dispersada) obtidos para as misturas de 2 anticorpos com partículas do vírus em função do tempo decorrido após a mistura. O aumento no diâmetro z-médio resulta da formação do complexo do anticorpo-vírus. O Anticorpo 1 mostra uma afinidade mais alta para o vírus indicado pela inclinação mais íngreme da curva.

Figura 1. distribuições de tamanho da Intensidade obtidas de 3 medidas da repetição de uma amostra de soro que contem anticorpos.

Figura lote de 2.A dos diâmetros z-médios das misturas de 2 anticorpos diferentes com um vírus em função do tempo decorrido após a mistura.

Conclusões

A espectroscopia da correlação do Fotão pode ser usada para medir o tamanho de partículas pequenas. É uma técnica não invasora que possa ser usada para avaliar a afinidade de vários anticorpos para um vírus particular.

Esta informação foi originária, revista e adaptada dos materiais fornecidos Instrumentos Ltd. de Malvern

Para obter mais informações sobre desta fonte, visite por favor Instrumentos Ltd. de Malvern

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