Caractérisation de Liposomes Comprenant La Taille et la Caractérisation Potentielle de Zeta des Liposomes Anioniques et Cationiques Utilisant le Nano de Zetasizer Des Instruments de Malvern

Sujets Couverts

Mouvement Propre
     Propriétés qui Effectuent le Destin des Liposomes En Intraveineuse Injectées
     Potentiel de Mesure de Zeta des Liposomes
Expérimental
     Préparation de Liposome
     Caractérisation de Liposome
Résultats
     Liposomes Anioniques
     Liposomes Cationiques
Conclusions

Mouvement Propre

Les Liposomes sont des vésicules composées de bilayer des molécules de lipide joignant un volume aqueux. Ils ont été au commencement utilisés en tant que systèmes modèles pour étudier des propriétés de membrane telles que la perméabilité. Les applications Récentes ont concentré sur leur utilisation en tant que véhicules d'accouchement de médicament dus à la capacité de comporter les matériaux solubles dans l'eau dans leur volume aqueux ou les matériaux solubles dans l'huile dans le bilayer de lipide. Des Liposomes peuvent être conçues pour des applications particulières par le contrôle de la composition de lipide ou de la modification de la surface par la conjugaison des anticorps ou des peptides. Par exemple, des liposomes cationiques sont utilisées dans les applications pour la thérapie génique dues à leur capacité du composé de l'ADN.

Propriétés qui Effectuent le Destin des Liposomes En Intraveineuse Injectées

Le destin des liposomes en intraveineuse injectées est déterminé par un certain nombre de propriétés. Deux du plus important sont dimension particulaire et potentiel de zéta. Chacun des deux paramètres peuvent être mesurés sur la chaîne Nanoe de Zetasizer des instruments. La dimension particulaire est mesurée utilisant la dispersion de la lumière dynamique (DLS). Cette technique mesure les variations dépendant du temps dans l'intensité de la lumière dispersée qui se produisent parce que les particules subissent le mouvement Brownien. L'Analyse de ces variations d'intensité active la détermination des coefficients de diffusion des particules qui sont converties en distribution de grandeurs.

Potentiel de Mesure de Zeta des Liposomes

Le potentiel de zéta d'une particule est la charge générale que la particule saisit dans un support particulier. La Connaissance du potentiel de zéta d'une préparation de liposome peut aider à prévoir le destin des liposomes in vivo. La Mesure du potentiel de zéta des échantillons dans le Nano de Zetasizer est faite utilisant la technique du laser Doppler velocimetry. Dans cette technique, une tension est appliquée en travers d'une paire d'électrodes à l'un ou l'autre de fin d'un contenant des cellules la dispersion de particules. Des particules Chargées sont attirées à l'électrode à l'opposé chargée et leur vitesse est mesurée et exprimée en intensité de champ d'ensemble en tant que leur mobilité électrophorétique. Les Informations supplémentaires sur ces techniques peuvent être trouvées dans d'autres application et notes techniques sur le site Web d'Instruments de Malvern.

Cette note d'application récapitule des mesures potentielles de taille et de zéta effectuées sur les liposomes anioniques et cationiques.

Expérimental

Préparation de Liposome

Des Liposomes ont été préparées par la méthode de sonication. Une suite de liposomes anioniques a été préparée à partir des mélanges variés du dipalmitoylphosphatidylcholine (DPPC) et du dipalmitoylphosphatidylglycerol dans saline tamponné aux phosphates (PBS) comme détaillé en liposomes Cationiques du tableau 1. ont été préparés à partir de DPPC, de cholestérol et du bromure diméthyle de dioctadecylammonium de surfactant cationique (DDAB) comme récapitulé dans le tableau 2. Dans tous les cas les concentrations finales des liposomes étaient 4mg lipid/ml PBS.

Tableau 1. Grammage de DPPC et de DPPG utilisés dans la préparation d'une suite de liposomes anioniques dans saline tamponné aux phosphates (PBS)

DPPC (magnésium)

DPPG (magnésium)

DPPG (naevus %)

PBS (ml)

19

1

5,2

5

18

2

10,9

5

17

3

17,4

5

16

4

24,6

5

15

5

32,8

5

Tableau 2. Grammages de DPPC, de cholestérol et de DDAB utilisés dans la préparation d'une suite de liposomes cationiques dans saline tamponné aux phosphates (PBS).

DPPC (magnésium)

Cholestérol (magnésium)

DDAB (magnésium)

DDAB (naevus %)

PBS (ml)

17

2

1

5,6

5

16

2

2

11,8

5

15

2

3

18,6

5

14

2

4

26,1

5

13

2

5

34,6

5

Les lipides ont été dissous et mélangés en chloroforme (DPPG a été dissous dans un mélange de chloroforme/de méthylène (2:1 le v/v)) et le solvant retiré par l'évaporation rotatoire à 60°C pour obtenir un film mince de lipide. Le volume approprié de saline tamponné aux phosphates (préchauffé à 60°C) a été ajouté et le récipient vigoureusement a été agité sur un mélangeur rotatoire pour produire les vésicules multilamellaires (MLVs). Le MLVs étaient alors bain soniqué à 60°C pendant 15 mn pour produire les liposomes unilamellar. Après sonication, les échantillons de liposome ont été incubés à 60°C pendant 15 mn pour leur permettre de recuire.

Caractérisation de Liposome

Toutes Les mesures potentielles de calibrage et de zéta ont été effectuées sur un Nano ZS de Zetasizer aux mesures du Calibrage 25°C. ont été effectuées sur les échantillons ordonnés de liposome, attendu que les échantillons ont été dilués 1 dans 10 avec PBS pour les mesures de potentiel de zéta. Le Nano ZS comporte les blocs optiques (NIBS™) rétrodiffusions non envahissants pour des mesures de classement par taille. La cornière de dépistage des mesures de la taille 173°enables des échantillons concentrés et troubles à effectuer. Cependant, la lumière dispersée trouvée des échantillons pendant une mesure potentielle de zéta est effectuée à la cornière avant de 12°. Par Conséquent l'à rayon laser doit pénétrer l'échantillon et par conséquent, la concentration d'échantillon pour des mesures potentielles de zéta doit être inférieure à celle pour le classement par taille.

Résultats

Liposomes Anioniques

Les résultats de la dimension particulaire et des mesures potentielles de zéta des liposomes anioniques variées sont récapitulés dans le tableau 3. Cette table affiche les diamètres z-moyens (les moyens diamètres basés sur l'intensité de la lumière dispersée), l'incrément de multidispersion (une estimation de la largeur de la distribution) et les valeurs potentielles de moyen zéta obtenues pour les échantillons variés de liposome. Les valeurs z-moyennes de diamètre sont les moyens de 3 mesures de répétition (écarts-type entre parenthèses) effectuées sur les échantillons ordonnés de liposome. Les valeurs potentielles de zéta sont les moyens de 5 mesures de répétition (écarts-type entre parenthèses) effectuées sur les échantillons dilués (1 dans 10 avec PBS).

Tableau 3. Les diamètres z-moyens dans le nanomètre, les valeurs de l'indice de multidispersion et les potentiels de zéta dans le système mv de liposomes anioniques variées ont préparé dans PBS. Les valeurs d'écart-type des mesures de répétition sont affichées entre parenthèses.

% du Naevus DPPG

Diamètre z-Poids du commerce dans le nanomètre (ÉCART-TYPE)

Multidispersion (ÉCART-TYPE)

Potentiel de Zeta dans le système mv (ÉCART-TYPE)

5,2

133,8 (0,4)

0,292 (0,01)

-9,0 (0,64)

10,9

92,3 (0,49)

0,269 (0,01)

-15,7 (1,36)

17,4

107,2 (0,20)

0,256 (0,01)

-22,5 (0,95)

24,6

125,1 (0,60)

0,261 (0,01)

-27,3 (1,29)

32,8

89,2 (1,39)

0,264 (0,01)

-31,4 (0,98)

Les résultats de calibrage obtenus pour l'exposition anionique de ces préparations de liposome que la méthode de sonication de bain de préparation donne aux moyens de taille et aux largeurs assimilés de distribution.

Les valeurs de potentiel et de taille de zéta sont tracées sur le schéma 1 en fonction du mole% DPPG. Les données prouvent que les mesures sont très reproductibles pour chaque échantillon de liposome et affichent la tendance prévue d'être plus négativement - chargé avec l'augmentation du teneur de DPPG. De plus, les résultats prouvent que la taille est indépendant de composition de liposome.

Le Schéma 1. valeurs de potentiel et de taille de Zeta obtenues en fonction du teneur de mole% DPPG pour une suite de liposomes anioniques.

Liposomes Cationiques

Le Tableau 4 récapitule les résultats potentiels de calibrage et de zéta obtenus pour la suite de liposomes cationiques. Les distributions de grandeurs Assimilées étaient comparées obtenu aux préparations anioniques de liposome. Le Schéma 2 affiche un traçage des résultats de potentiel et de taille de zéta obtenus en fonction du mole% DDAB et affiche une augmentation graduelle de charge positive à mesure que la teneur en DDAB des liposomes augmente.

Tableau 4. Les diamètres z-moyens dans le nanomètre, les valeurs de l'indice de multidispersion et les potentiels de zéta dans le système mv de liposomes cationiques variées ont préparé dans PBS. Les valeurs d'écart-type des mesures de répétition sont affichées entre parenthèses.

% du Naevus DDAB

Diamètre z-Poids du commerce dans le nanomètre (ÉCART-TYPE)

Multidispersion (ÉCART-TYPE)

Potentiel de Zeta dans le système mv (ÉCART-TYPE)

5,6

116,6 (1,0)

0,258 (0,01)

10,3 (0,88)

11,8

95,8 (0,36)

0,223 (0,01)

20,1 (1,36)

18,6

120,3 (0,40)

0,266 (0,01)

25,9 (0,52)

26,1

109,0 (1,15)

0,270 (0,01)

33,1 (2,2)

34,6

104,0 (0,42)

0,251 (0,01)

39,5 (1,2)

Le Schéma 2. valeurs de potentiel et de taille de Zeta obtenues en fonction du teneur de mole% DDAB pour une suite de liposomes cationiques

Conclusions

La caractérisation matérielle des liposomes est d'importance grande en comprenant leur aptitude à une gamme d'applications. La Connaissance du potentiel de zéta d'une préparation de liposome peut aider à prévoir le destin des liposomes in vivo. L'Association des liposomes chargées avec les molécules à l'opposé chargées peut être surveillée en mesurant le potentiel de zéta du composé donnant droit.

La suite Nanoe de Zetasizer active la caractérisation rapide et reproductible de la taille et du potentiel de zéta des liposomes comme détaillé dans cette note d'application.

Note : Une liste complète de références peut être trouvée en se rapportant au document source.

Source : « Taille et Caractérisation Potentielle de Zeta des Liposomes Anioniques et Cationiques sur Le Nano de Zetasizer », Note d'Application par des Instruments de Malvern.

Pour plus d'informations sur cette source visitez s'il vous plaît Malvern Instruments Ltd (R-U) ou les Instruments de Malvern (ETATS-UNIS).

Date Added: May 6, 2005 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 01:22

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