Liposomes Karakterisering Met Inbegrip Van de Potentiële Karakterisering van de Grootte en Zeta van Anionische en Van Kationen Liposomes die Zetasizer Nano Van Instrumenten Malvern Gebruiken

Besproken Onderwerpen

Achtergrond
     Eigenschappen die het Lot van Intraveneus Ingespoten Liposomes Uitvoeren
     Het Meten van Zeta Potentieel van Liposomes
Experimenteel
     Liposome Voorbereiding
     Liposome Karakterisering
Resultaten
     Anionische Liposomes
     Liposomes Van Kationen
Conclusies

Achtergrond

Liposomes zijn blaasjes uit een bilayer van lipidemolecules worden samengesteld die een waterig volume insluiten dat. Zij werden aanvankelijk gebruikt als modelsystemen aan de eigenschappen van het studiemembraan zoals doordringbaarheid. De Recente toepassingen hebben op hun gebruik als voertuigen van de druglevering toe te schrijven aan de capaciteit van het opnemen van in water oplosbare materialen in hun waterige volume of olie oplosbare materialen in het lipide bilayer de nadruk gelegd. Liposomes kunnen voor specifieke toepassingen door controle van de lipidesamenstelling of wijziging van de oppervlakte door vervoeging van antilichamen of peptides worden ontworpen. Bijvoorbeeld, worden liposomes van kationen gebruikt in de toepassingen van de gentherapie toe te schrijven aan hun capaciteit aan complex aan DNA.

Eigenschappen die het Lot van Intraveneus Ingespoten Liposomes Uitvoeren

Het lot van intraveneus ingespoten liposomes wordt bepaald door een aantal eigenschappen. Twee van belangrijkst zijn deeltjesgrootte en zeta potentieel. Beide parameters kunnen op de Nano waaier Zetasizer van instrumenten worden gemeten. De grootte van het Deeltje wordt gemeten gebruikend zich het dynamische lichte verspreiden (DLS). Deze techniek meet de time-dependent schommelingen in de intensiteit van verspreid licht die voorkomen omdat de deeltjes Brownbeweging ondergaan. De Analyse van deze intensiteitsschommelingen laat de bepaling van de verspreidingscoëfficiënten van toe de deeltjes die in een groottedistributie worden omgezet.

Het Meten van Zeta Potentieel van Liposomes

Het zeta potentieel van een deeltje is de algemene last die het deeltje in een bepaald middel verwerft. De Kennis van het zeta potentieel van een liposome voorbereiding kan helpen om het lot van liposomes in vivo te voorspellen. De Meting van het zeta potentieel van steekproeven in Nano Zetasizer wordt gedaan gebruikend de velocimetry techniek van laser Doppler. In deze techniek, wordt een voltage toegepast over een paar elektroden op één van beide eind van cellen bevattend de deeltjesverspreiding. De Geladen deeltjes worden aangetrokken naar de tegengesteld geladen elektrode en hun snelheid wordt gemeten en in de sterkte van het eenheidsgebied als hun elektroforetische mobiliteit uitgedrukt. De Verdere informatie over deze technieken kan in andere toepassing en technische nota's worden gevonden over de website van Instrumenten Malvern.

Deze toepassingsnota vat grootte en zeta potentiële die metingen samen op zowel anionische als van kationen liposomes worden gemaakt.

Experimenteel

Liposome Voorbereiding

Liposomes werden voorbereid door de sonication methode. Een reeks anionische liposomes werd voorbereid van diverse mengsels van dipalmitoylphosphatidylcholine (DPPC) en dipalmitoylphosphatidylglycerol in fosfaat voor als buffer opgetreden zout (PBS) zoals die in lijst 1 wordt gedetailleerd. Liposomes Van Kationen werden voorbereid van DPPC, cholesterol en het bromide van kationen van capillair-actieve stof dimethyl dioctadecylammonium (DDAB) zoals samengevat in lijst 2. In alle gevallen waren de definitieve concentraties van liposomes 4mg lipid/ml PBS.

Lijst 1. Gewichten van DPPC en DPPG in de voorbereiding van een reeks anionische liposomes in zout die als buffer opgetreden voor fosfaat wordt gebruikt (PBS)

DPPC (mg)

DPPG (mg)

DPPG (mol %)

PBS (ml)

19

1

5.2

5

18

2

10.9

5

17

3

17.4

5

16

4

24.6

5

15

5

32.8

5

Lijst 2. Gewichten van DPPC, cholesterol en DDAB in de voorbereiding van een reeks liposomes van kationen in zout die als buffer opgetreden voor fosfaat wordt gebruikt (PBS).

DPPC (mg)

Cholesterol (mg)

DDAB (mg)

DDAB (mol %)

PBS (ml)

17

2

1

5.6

5

16

2

2

11.8

5

15

2

3

18.6

5

14

2

4

26.1

5

13

2

5

34.6

5

De lipiden werden opgelost en werden gemengd in chloroform (DPPG werd opgelost in een mengsel van chloroform/methanol (2:1 v/v)) en het oplosmiddel door roterende verdamping bij 60°C wordt verwijderd om een dunne lipidefilm te verkrijgen die. Het aangewezen volume van fosfaat voor als buffer opgetreden zout (voorverwarmd bij 60°C) werd toegevoegd en het schip geageerd krachtig op een roterende mixer om multilamellar blaasjes (MLVs) te produceren. MLVs was toen bad bij 60°C 15 minuten wordt gesonoriseerd die unilamellar liposomes te produceren. Na sonication, werden de liposome steekproeven uitgebroed bij 60°C 15 minuten om hen toe te staan om te ontharden.

Liposome Karakterisering

Allen en zeta de potentiële metingen die werden gemaakt op een Zetasizer rangschikken Nano ZS bij 25°C. die metingen Rangschikken op de keurige liposome steekproeven werden gemaakt, terwijl de steekproeven 1 in 10 met PBS voor de zeta potentiële metingen verdund waren. Nano ZS neemt niet-invasieve backscatter (NIBS™) optica voor het rangschikken van metingen op. De opsporingshoek van 173°enables groottemetingen van geconcentreerde, troebele te maken steekproeven. Nochtans, wordt het verspreide die licht van steekproeven tijdens een zeta potentiële meting wordt ontdekt gemaakt bij de voorwaartse hoek van 12°. Daarom moet de laserstraal de steekproef doordringen en bijgevolg, moet de steekproefconcentratie voor zeta potentiële metingen lager zijn dan dat voor het rangschikken.

Resultaten

Anionische Liposomes

De resultaten van de deeltje het rangschikken en zeta potentiële metingen van diverse anionische liposomes worden samengevat in lijst 3. Deze lijst toont de z-gemiddelde diameters (de gemiddelde die diameters op de intensiteit van verspreid licht worden gebaseerd), de polydispersity index (een raming van de breedte van de distributie) en de gemiddelde zeta potentiële die waarden voor de diverse liposome steekproeven worden verkregen. De z-gemiddelde diameterwaarden zijn de middelen van 3 herhalen metingen (standaarddieafwijkingen tussen haakjes) op de keurige liposome steekproeven worden gemaakt. De zeta potentiële waarden zijn de middelen van 5 herhalen metingen (standaarddieafwijkingen tussen haakjes) op verdunde steekproeven (1 in 10 met PBS) worden gemaakt.

Lijst 3. De z-gemiddelde diameters in NM, polydispersity indexwaarden en zeta potentieel in mV van diverse anionische liposomes troffen in PBS voorbereidingen. De standaardafwijkingswaarden van de herhalingsmetingen worden tussen haakjes getoond.

Mol % DPPG

z-Av Dia in NM (BR)

Polydispersity (BR)

Zeta Potentieel in mV (BR)

5.2

133.8 (0.4)

0.292 (0.01)

-9.0 (0.64)

10.9

92.3 (0.49)

0.269 (0.01)

-15.7 (1.36)

17.4

107.2 (0.20)

0.256 (0.01)

-22.5 (0.95)

24.6

125.1 (0.60)

0.261 (0.01)

-27.3 (1.29)

32.8

89.2 (1.39)

0.264 (0.01)

-31.4 (0.98)

De het rangschikken resultaten voor deze anionische liposome voorbereidingen worden verkregen tonen aan dat de badsonication methode van voorbereiding gelijkaardige groottemiddelen en distributiebreedten die geeft.

De zeta potentieel en groottewaarden worden in kaart gebracht in figuur 1 als functie van mole% DPPG. De gegevens tonen aan dat de metingen zeer herhaalbaar voor elke liposome steekproef zijn en de verwachte tendens van worden meer negatief - belast met stijgende inhoud DPPG tonen. Bovendien tonen de resultaten aan dat de grootte van de liposome samenstelling onafhankelijk is.

Figuur 1. Zeta potentieel en groottewaarden als functie van de mole% inhoud DPPG voor een reeks die anionische liposomes worden verkregen.

Liposomes Van Kationen

Lijst 4 vat de het rangschikken en zeta potentiële die resultaten samen voor de reeks liposomes van kationen worden verkregen. De Gelijkaardige groottedistributies werden verkregen vergeleken bij de anionische liposome voorbereidingen. Figuur 2 toont een perceel van de zeta potentieel en grootteresultaten als functie van mole% DDAB worden verkregen en toont een geleidelijke verhoging van positieve last aangezien de inhoud die DDAB van liposomes stijgt.

Lijst 4. De z-gemiddelde diameters in NM, polydispersity indexwaarden en zeta potentieel in mV van diverse liposomes van kationen troffen in PBS voorbereidingen. De standaardafwijkingswaarden van de herhalingsmetingen worden tussen haakjes getoond.

Mol % DDAB

z-Av Dia in NM (BR)

Polydispersity (BR)

Zeta Potentieel in mV (BR)

5.6

116.6 (1.0)

0.258 (0.01)

10.3 (0.88)

11.8

95.8 (0.36)

0.223 (0.01)

20.1 (1.36)

18.6

120.3 (0.40)

0.266 (0.01)

25.9 (0.52)

26.1

109.0 (1.15)

0.270 (0.01)

33.1 (2.2)

34.6

104.0 (0.42)

0.251 (0.01)

39.5 (1.2)

Figuur 2. Zeta potentieel en groottewaarden als functie van de mole% inhoud DDAB voor een reeks die liposomes van kationen worden verkregen

Conclusies

De fysieke karakterisering van liposomes is van groot belang in het begrip van hun geschiktheid voor een waaier van toepassingen. De Kennis van het zeta potentieel van een liposome voorbereiding kan helpen om het lot van liposomes in vivo te voorspellen. De Vereniging van geladen liposomes met tegengesteld geladen molecules kan worden gecontroleerd door het zeta potentieel te meten van complex voortvloeien.

De Nano reeks Zetasizer laat de snelle en herhaalbare karakterisering van zowel grootte als zeta potentieel van liposomes toe zoals die in deze toepassingsnota wordt gedetailleerd.

Nota: Een volledige lijst van verwijzingen kan worden gevonden door naar het brondocument te verwijzen.

Bron: „De Potentiële Karakterisering van de Grootte en Zeta van Anionische en Van Kationen Liposomes op Zetasizer Nano“, de Nota van de Toepassing door Malvern Instruments.

Voor meer informatie over deze bron te bezoeken gelieve Instrumenten Malvern Instruments Ltd (het UK) of Malvern (de V.S.).

Date Added: May 6, 2005 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 01:19

Ask A Question

Do you have a question you'd like to ask regarding this article?

Leave your feedback
Submit