Характеризация Точки плавления Протеинов Используя Систему Zetasizer Nano От Аппаратур Malvern

Покрытые Темы

Предпосылка
Denaturation Протеинов
Динамический Светлый Разбрасывать для Характеризации Протеинов
Точка плавления Протеина
Факторы Влияя На Точку плавления Протеинов
Система Malvern Zetasizer Nano

Предпосылка

Протеины составлены цепей полипептида, синтезировано внутри клетка от бассеина 20 различных типов аминокислоты. В отличие от полимеров manmade и случайной катушки биологических, цепи полипептида протеина сложены в уникально 3 габаритных структуры в natured положении. Эти структуры стабилизированы взаимодействиями сочетание из электростатическими и гидродобными, вместе с образованием множественных скреплений водопода между бортовыми цепями аминокислот внутри структура.

Denaturation Протеинов

Протеины были эволюционированы для того чтобы выполнить специфические функции внутри биологические системы, как катализировать реакции и транспортировать малые молекулы или ионы. Эта функциональность требует большую степень гибкости внутри структура протеина. Как таковой, взаимодействия стабилизируя структуру протеина как раз достаточны для поддержания структуры внутри узкий ряд условий окружающей среды. Если условия разрешения вне этого ряда, например через изменение в пэ-аш или температуре, то entropically управляемые denaturation или развёртка могут быстро произойти. Когда denaturation происходит, малый размер протеина увеличен к значению последовательному с случайным полимером катушки такого же молекулярного веса. В отсутствии chaotropic (комплексирование запрещая) агентов, взаимодействия взаимо--полимера гидродобные могут быстро вести к неспецифичному комплексированию денатурированных цепей полипептида. Представление процесса denaturation, вместе с последующим изменением в размере показано в Диаграмме 1.

Диаграмма 1. Схема детализируя процесс denaturation протеина и последующее изменение в гидродинамическом размере показанном диаметром твердого круга.

Динамический Светлый Разбрасывать для Характеризации Протеинов

Динамический светлый разбрасывать (DLS) длиной было использован как инструмент характеризации протеина. В DLS, измерено Броуновское движение частиц, и гидродинамический размер высчитан используя уровнение Гладить рукой-Эйнштейна. Чувствительность DLS достаточна для того чтобы различить различные олигомерные и кватернарные положения протеина, и идеально одета для контролировать стабилность структуры протеина к денатурировать условия.

Точка плавления Протеина

Точка плавления протеина (TM) определена как температура на которой протеин денатурирует. Изменение в размере который сопровождает denaturation протеина легко определено используя методы DLS. Рассматривайте Диаграмму 2 например, на которую показано температуре зависимый Z-Средний диаметр и интенсивность разбрасывать для Овальбумина в saline амортизированное фосфатом (PBS) измеренном с Zetasizer Nano ZS. На температурах чем 71°C, размер и интенсивность разбрасывать константа, предлагая стабилизированную третичную структуру. На 71°C и высоко, и размер и разбрасывать увеличение интенсивности в геометрической прогрессии при температура, показывая присутсвие денатурированных компоситов.

Диаграмма 2. след и гистерезис Точки плавления для Овальбумина в PBS.

Факторы Влияя На Точку плавления Протеинов

Из-за уникально основной последовательности аминокислот связанных с специфическими типами протеина, точки плавления могут отличать значительно. Разрешения подготовляют, например пэ-аш и концентрация соли, и вывешивают поступательные изменения, например glycosylation, может также иметь маркированное влияние на стабилности структуры протеина и следовательно плавя температуры. Измерения Точки плавления после этого важный шаг в полную характеризацию протеина цели, в частности если протеин которому сужденно для внедрения в фармацевтический продукт или образование. На Диаграмму 3 показано следы точки плавления для серии протеинов в PBS. Автоматизированные измерения были собраны с Zetasizer Nano ZS, используя дифференциальный пандус температуры 1°C и мельчайшее время уравновешенности 3 на каждой температуре измерения.

Диаграмма 3. следы Точки плавления и значения TM для серии протеинов в PBS.

Система Malvern Zetasizer Nano

Zetasizer Nano ZS от Аппаратур Malvern первая коммерчески аппаратура для того чтобы включить оборудование и ПО для совмещенных динамических, статических, и электрофорезных измерений светлый разбрасывать, давая исследователю широкий диапазон свойств образца, включая размер, молекулярный вес, и потенциал zeta. Система специфически была конструирована для того чтобы соотвествовать низкие тома концентрации и образца типично связанные с фармацевтическими и биомолекулярными применениями, вместе с требованиями к высокой концентрации для коллоидных применений. Удовлетворять это уникально смешивание требований был совершен через внедрение оптической системы backscatter и конструкции романной камеры клетки. Как последствие этих характеристик, спецификации Zetasizer Nano ZS для размера выборки и концентрация превышают те для любой другой имеющей на рынке аппаратуры DLS, с рядом размера 0.6nm к 6um, и ряд концентрации лизозима 0.1mg/mL к W/v. 40%. Как добавленная тантьема, оборудование Zetasizer Nano ZS собственная личность оптимизируя, и ПО включает уникально «измерение одного щелчка», анализирует, и сообщает характеристику конструированную для того чтобы уменьшить новую кривую освоения пользователя.

Date Added: May 9, 2005 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 01:45

Ask A Question

Do you have a question you'd like to ask regarding this article?

Leave your feedback
Submit