Complejos del Proteína-Polielectrolito y La Caracterización de los Complejos de la Proteína-Polyelectrolyre Usando El Malvern Zetasizer ZS

Temas Revestidos

Antecedentes
Experimental
Resultados

Antecedentes

Las acciones recíprocas que regulaban la complejación del proteína-polielectrolito han sido el tema de muchos estudios en las áreas de aplicación de la purificación de la proteína, inmovilización de la enzima, el immunosensing, y sensores bioactivos. Estos estudios también han ayudado en la comprensión de los sistemas biológicos, por ejemplo, DNA-atando las proteínas, un campo en el cual la química física general de las acciones recíprocas se ha subordinado a los estudios del almacenamiento, de la réplica, y de los mecanismos de la transcripción. Esta nota de aplicación destaca el uso del Malvern Zetasizer ZS Nano para la caracterización de los complejos del proteína-polielectrolito (PPCs).

Experimental

El sistema del PPC examinado en este estudio fue compuesto de la albúmina del suero vacuno (BSA), con una punta isoeléctrica (pI) de 4,8, y una aduana sintetizó el copolímero aniónico del 60% 2 acrilamidas de acrylamido-2-methylpropanesulfonate y del 40% (AMPS60Aam40). las soluciones del Proteína-Polielectrolito fueron preparadas en una relación de transformación de la masa del 5:1 de la proteína al polielectrolito en 250 milímetros de NaCl en pH 8,5. Las mediciones Dinámicas de la dispersión luminosa de las soluciones filtradas (Sartorio de 0,22 milímetros) cerco con el sistema Nano de Zetasizer ZS en 0,2 intervalos de unidad del pH de pH 8,5 a pH 4,2. La deconvolución de la curva medida de la correlación a una distribución dimensional de la intensidad era realizada usando un algoritmo no negativo de los mínimos cuadráticos.

Resultados

El Cuadro 1 muestra a intensidad las distribuciones dimensionales para BSA, AMPS60AAm40, y el complejo en pH 8,5. En este pH, la carga negativa en la proteína es suficiente prohibir la complejación con el polyanion. Debido a la concentración en masa más alta y la naturaleza globular de la proteína, el polyanion desatado no se puede detectar en presencia de la proteína.

Cuadro 1. distribuciones dimensionales de la Intensidad para BSA, AMPS60Aam40, PAMPS80, y una mezcla BSA-AMPS60AAm40 en 250 milímetros de NaCl en pH 8,5.

La dependencia del pH del diámetro Z-Medio para el complejo del proteína-polielectrolito se muestra en el Cuadro 2, que indica una desviación de la línea de fondo en circa pH 5,0. La talla Z-Media es el diámetro del medio cargado de la intensidad, derivado de Cumulantes o el único ajuste exponencial de la función de autocorrelación de la intensidad. La desviación de las linearidades mostradas en el cuadro 2 es típica de mezclas del proteína-polielectrolito, y permite que uno defina el pH de la formación compleja inicial (pHc). En pH 5, la carga de la red BSA es negativa. Como tal, el atascamiento de BSA a un polyanion en pH 5,0 sugiere que las acciones recíprocas de la proteína-polyelectrolye sean locales, entre negativo - el polímero cargado y una corrección de la carga positiva en la superficie de la proteína.

Cuadro 2. dependencia del pH del diámetro Z-Medio de BSA-AMPS60AAm40 en 250 milímetros de NaCl.

El Cuadro 3 muestra a intensidad las distribuciones dimensionales para el complejo del proteína-polielectrolito para el pHc del ¡Ü del pH. Como se ve en el Cuadro 3, una distribución bimodal es sin obstrucción visible en el inicio de la complejación. El modo de difusión más rápido, con un diámetro evidente de 8 nanómetro, corresponde para liberar BSA. El modo de difusión más lento en circa 75 nanómetro representa el complejo del proteína-polímero, con una talla evidente que sea áspero lo mismo que la del polielectrolito libre. Como se disminuye el pH, la talla evidente de las rotaciones máximas complejas para bajar valores, acompañada por una disminución de la intensidad relativa el dispersar de BSA libre. Esta reducción en la intensidad relativa el dispersar de la proteína libre sugiere que la reducción del pH lleva a un aumento en el atascamiento de la proteína y la formación compleja.

Cuadro 3. distribuciones dimensionales de la Intensidad para el complejo BSA-AMPS60AAm40 para el pHc del ¡Ü del pH.

Nota: Un conjunto completo de referencias puede ser encontrado refiriendo al documento de fuente.

Fuente: “Caracterización de los Complejos del Proteína-Polielectrolito”, Nota de Aplicación por los Instrumentos de Malvern.

Para más información sobre esta fuente visite por favor Malvern Instruments Ltd (REINO UNIDO) o los Instrumentos de Malvern (los E.E.U.U.).

Date Added: May 12, 2005 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 01:48

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