Rikta Visualisation som Storleksanpassar och Räknar av Exosomes genom Att Använda NanoparticleSpårningAnalys (NTA) från NanoSight

Vid AZoNano

Täckte Ämnen

Inledning
Avkänna och Räkna Exosomes
Alternativa Tekniker
Selectivity av Mätningen
Summariskt

Inledning

Microvesicles (i 100nmen till 1um spänna typisk) och nanovesicles som kallades också exosomes (30-100nm), troddes initialt för att vara cell- skräp. Emellertid uppskattas det nu att dessa cell-härledde partiklar är av viktig betydelse och leker en viktig roll både i cell till cellkommunikationen och att signalera för cell.

Deras betydelse har för en tid sedan blivit igenkänd, sedan det upptäcktes att de är närvarande på markant högstämt jämnar i ett nummer av sjukdomar villkorar den inklusive koronara artärsjukdomen, upphetsas sjukdomar, pre-eclampsia, sockersjuka och cancer. Detta riktar lönelyfter ifrågasätta av deras roll i pathogenesis såväl som deras möjlighetbruk som biomarkers.

I sådan omständighet är exosomes typisk närvarande in markant högre numrerar, än microvesicles och stunden det processaa av bildandet av dessa partiklar är stilla ämnet av debatten, gör deras högre koncentration characterisationen av dessa mindre partiklar av potentiell betydelse benämner in av tidigare och känsligare upptäckt.

NanoSight erbjuder ett nytt laser-baserat system för NanoparticleSpårning (NTA)Analys som låter specifikt microsomal, och exosome partiklar direkt och individuellt att visualisera och räknt i flytande i real-time och från vilken partikel med hög upplösning storleksanpassar fördelning profilerar kan erhållas.

Tekniken är enkel att använda, fastar, robustt, exakt och kostar - effektivt och att föreställa ett attraktivt alternativ eller ett komplement till existerande metoder av nanoparticleanalys liksom FlödesCytometry, en ElektronMicroscopy eller en Dynamisk Ljus Spridning, DLS (också som är bekant som FotonKorrelationSpektroskopin, PCS).

Avkänna och Räkna Exosomes

NanoSighten instrumenterar erbjudanden en unik inblick in i exosomes i spänna av 50nm - 1000nm.

Tekniken är mångsidig, och den normalt enkla förtunningen är tillräcklig att mäta koncentrationen av partikelgåva i ta prov. Initialt kan ta prov visuellt kontrolleras för närvaroen av större partiklar, eller samlat materiellt (Figurera 1a), efter, som användaren kan snabbt frambringa en kickupplösningspartikel storleksanpassar fördelning profilerar, och en räkning (i benämner av evig sanning numrerar koncentration), av de sedda vesiclesna (Figurera 1b).

Figurera 1. Ta Prov av utspätt platelet-fritt plasma. A) Ett typisk avbildar producerat av den NanoSight tekniken. Avbilda låter användarena ögonblickligen känna igen bestämda särdrag om deras tar prov inklusive koncentration och jämnar av polydispersity. B) Partikeln storleksanpassar fördelning och beräknad original- koncentration från ta prov.

Alternativa Tekniker

Historically har ett nummer av tekniker varit van vid karakteriserar microvesicles och nanovesicles med mer tekniker som är tillgängliga till de mikrostorleksanpassade partiklarna.

Analytiska Tekniker:

Antagligen är den mest allmänningen av dessa Flödescytometryen. Den typiska Reklamfilmflödescytometryen har ett lägre att storleksanpassa begränsar av runt om 300nm som peka på signalera är som inte kan särskiljas från grundlinjen stojar jämnt. Fördriva denna upptäckt begränsar kan fördjupas med bruket av fluorescerande etiketter, på lägre storleksanpassar kapaciteten exakt att storleksanpassa sådan partiklar begränsas strängt.

Den Dynamiska Ljusa Spridningen (DLS) har också använts i denna applikation men att vara en helhetmätning, består av resultaten endera en enkel z-genomsnitt (vägd styrka) partikel storleksanpassar, och polydispersity eller enupplösning partikel storleksanpassar mycket fördelning profilerar. Avgörande är ingen information om partikelkoncentration tillgänglig, och DLS kan inte mäta fluorescerande-märkta partiklar.

Elektronmicroscopy är en användbar forskning bearbetar för att studera som är mikro, och nanovesicles, men på uppta som omkostnad av huvudstad och spring kostar, tar prov förberedelse- och genomgångstid och tar prov fullständighet tar prov efter förberedelsen.

Selectivity av Mätningen

Stunden är den vanligt adekvat att bestämma bara huruvida partiklar av ett bestämt storleksanpassar eller storleksanpassar spänner är närvarande i en ta prov, är det ofta mycket viktigare att identifiera och att diskriminera specifika under-befolkningar av partiklar inom ta prov. Den NanoSight tekniken är kapabel av analysering selektivt av sådan befolkningar till och med, för anföra som exempel, bruket av antikropp-medlat fluorescerande märka. Detta att närma sig låter användaren avkänna, att analysera, och att räkna endast de specifika nanoparticlesna, som demärkta antikropprörorna, bakgrundsnon-närmare detalj ämne som består av partiklar som är uteslutna till och med bruket av, anslår till optiskt, filtrerar. Fördriva en spänna av fluorophores kan användas, det är fördelaktigt att använda kick-effektivitet, kickstabilitetsquantum pricker (QDot®) etiketter för bäst resultat.

Detta visas in Figurerar 2A som visar att en singelvideo inramar av fluorescence som sänds ut lätt från quantum pricker upphetsad med en NanoSight instrumenterar inpassat med en blåttlaser-diod. Dessa quantum pricker var den van vid etiketten per närmare detalj för antikropp (NDOG II) till uppsätta som målbiomarkergåvan på en syncytiotrophoblastmicrovesicle (STBM).

Figurera 2. A) Fluorescence avbildar från quantum pricker fäst via antikropp till STBM-partiklar. B) Partikeln storleksanpassar fördelningor från (den röda) spridda ljusa (blått) korrekta antikroppen och den oriktiga (kontrollera), antikroppen (gräsplan). Notera axeln för numrerakoncentrationslodlinjen.

Figurera 2B shows tre storleksanpassar fördelningsvisning: jag) alla partiklar som gåva i STBMEN tar prov (blålinjen) som avkänt vid (non-fluorescerande) tänder scatteren, ii) partiklarna, som den fluorescerande QDot-märkta antikroppen för NDOG II hade till destinerat specifikt, som mäter under fluorescencefunktionsläget (röd linje) och iii) en kontrollera (gräsplan fodrar) som består av en på motsvarande sätt märkt QDot-märkt antikropp med ingen frändskap till uppsätta som målbiomarkeren på STBMEN (som mätas också i fluorescencefunktionsläge). Detta visar att majoriteten av partikelgåvan i ta prov var lyckat och specifikt märkt av STBM-närmare detalj Q-Pricka-NDOG antikropp II och att kontrollera visade lyckat ett mycket lågt signalera.

Summariskt

Den NanoSight tekniken kan lyckat storleksanpassa, och att räkna både microvesicles och exosomes på en låg koncentration och, när det används i samverkan med fluorescerande etiketter, kan selektivt bestämma, och att analysera specifika typer av partikeln inom ett komplex ta prov.

Denna information har varit sourced, granskad och anpassad från material förutsatt att av NanoSight.

För mer information behaga besök NanoSight.

Date Added: Oct 17, 2010 | Updated: Mar 7, 2013

Last Update: 7. March 2013 11:34

Ask A Question

Do you have a question you'd like to ask regarding this article?

Leave your feedback
Submit