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Direkte Kinase-Einschätzung in den Gewebe-Proben Unter Verwendung Integrierter Plattform Microfluidic und der Darstellung

Published on November 2, 2010 at 4:08 AM

Ungeeignetes Wachstums- und Überlebenssignalisieren, das zu das anomale Wachstum von Krebszellen führt, ist eine treibende Kraft hinter Tumoren.

Viel von aktuellen Krebsforschungsschwerpunkten auf den Kinaseenzymen, deren Veränderungen für solches disregulated Signalisieren verantwortlich sind und viel erfolgreiche molekular gerichtete krebsbekämpfende Therapeutik werden an sperrender Kinaseaktivität verwiesen.

Jetzt haben UCLA-Forscher vom Crump-Institut für Molekulare Darstellung, das Institut für Molekulare Medizin, das Institut Kaliforniens NanoSystems, die Umfassende Krebs-Mitte Jonsson und die Abteilung der molekularen und medizinischen Pharmakologie eine in-vitromethode für das Einschätzen von Kinaseaktivität in den winzigen Gewebeproben von den Patienten entwickelt. Die Methode bezieht eine integrierte microfluidics und Darstellungsplattform mit ein, die enzymatische Aktivität der Kinase von nur 3.000 Zellen reproduzierbar messen kann.

In einem Papier, das Am 1. November in der Zapfen Krebsforschung veröffentlicht wird, beschreiben die UCLA-Forscher einige neue technologische Fortschritte in microfluidics und Darstellungsbefund, den sie zusammen entwickel, um Kinaseaktivität in Klein-input Proben zu messen. Das Team wendete ihre microfluidic Kinasewertbestimmung an den menschlichen Leukämiepatientenproben an.

„Weil die Einheit nur eine sehr kleine Gewebeprobe benötigt, Ergebnisse zu geben, erstellt diese Methode neues Potenzial für direktes Kinaseexperimentieren und Diagnosen auf geduldigem Blut, biopsieren Knochenmark und Nadel Proben,“ sagte führenden Forscher Thomas Graeber, ein UCLA-Professor der molekularen und medizinischen Pharmakologie. „Zum Beispiel, können die Stammzelleeigenschaften der Leukämie von den geduldigen Proben direkt studiert werden.“

Um Funksignal Befund zu verbessern, verwendete das Team einen neuen Darstellungsdetektor, in Form einer Festkörperbetakamera, die radioaktives Signal direkt von einem microfluidic Chip empfindlich entdecken und räumlich lösen kann. Die Betakamera stellt eine Abbildung der Aktivität auf dem Chip zur Verfügung und erlaubt Echtzeitüberwachung der Wertbestimmungsleistung und -ergebnisses. Sie ist in hohem Grade empfindlich und quantitativ.

In ihrer ersten Anwendung der Einheit, maß das Team die Aktivität der veränderten Kinase, die für chronische myeloische Leukämie verantwortlich ist. Diese Veränderung wird durch den klinisch erfolgreichen Kinasehibitor Gleevec anvisiert.

„Wir berücksichtigen nicht andere Arbeit, die integrierte radioaktive Festkörperdarstellung von einer microfluidic Plattform zeigt,“ sagte Mitforscher ARION Chatziioannou, ein UCLA-Professor der molekularen und medizinischen Pharmakologie.

Die resultierende microfluidic in-vitrokinaseradioprobe verbessert die Reaktions-Leistungsfähigkeit, verglichen mit Standardwertbestimmungen und kann in weniger Zeit viel aufbereitet werden. Diese größere Leistungsfähigkeit, verbunden mit der hohen Empfindlichkeit der Betakamera, verringert die Menge der Beispielzelle eingegeben durch zwei bis drei Größenordnungen, verglichen mit den herkömmlichen und 96 wohlen Wertbestimmungen. Die Wertbestimmung umfaßt einen Kinase immunocapture Schritt, um Besonderheit in Richtung zur Kinase von Zinsen zu erhöhen.

„Die Kinasewertbestimmung erhalten, um in einer microfluidic Umgebung zu arbeiten, mussten wir neue Protokolle entwickeln und Reagenzien für effizient Manipulierungskinase-Erfassungsraupen der zuverlässigen Unterstützung unter Verwendung microfluidic Falle-undfreigabe Ventile,“ sagte Mitforscher Hsian-Rong Tseng, ein UCLA-Professor der molekularen und medizinischen Pharmakologie.

„Integration der Festkörperbetakamera erlaubt Forschern, die Wertbestimmung in der Istzeit zu überwachen, die nützlich während unserer Protokollentwicklung und -prüfung prüfte,“ sagte Cong-Reißzahn, den führenden Studenten im Aufbaustudium auf dem Projekt. „Die integrierte microfluidic und Darstellungsplattform öffnet neue Möglichkeiten und ermöglicht Miniaturisierung von vielen geläufigen Radioaktivität-basierten biologischen Drogenerprobungen zum microfluidic Reich.“

„Mit der Integration der Kompaktkamera, hat die microfluidic Formatwertbestimmung das Potenzial, zur billigen Prüftischoberseite sich zu entwickeln, unabhängige Geräte,“ sagte UCLA-promovierten wissenschaftlichen Mitarbeiter Nam Vu, der die Darstellungsentwicklung führte.

„Zusammen Genommen, ermöglicht der verringerte Beispielinput, der benötigt werden, die verringerte Wertbestimmungszeit und die digitalgesteuerte Reproduzierbarkeit der microfluidic Kinaseradioprobe des Teams direktes Experimentieren auf klinischen Proben, die entweder kostbar oder verderblich sind,“ sagten UCLA-promovierten wissenschaftlichen Mitarbeiter Yanju Wang, der die Auslegung des Netzes der microfluidic Bauteile führte, die die Wertbestimmung ausführen.

Zukünftige Experimente entwickeln reproduzierbare Beispielsammlungs- und -maßbedingungen für geduldige Hauptproben.

Andere Anwendungen konnten das Ein Profil erstellen von geduldigen und tierischen vorbildlichen Proben für ihre Kinasehibitor Drogenempfindlichkeit oder Maß der Kinaseaktivität von den Stammzellen, von den KrebsStammzellen und von anderen seltenen Immunzellen umfassen.

Quelle: http://www.newsroom.ucla.edu/

Last Update: 11. January 2012 20:39

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