Подсчитывать, Загрунтовка и Визуализируя Комплексирование в Протеинах Используя Анализ Nanoparticle Отслеживая

AZoNano

Покрытые Темы

Введение
Компоситы Протеина Воображения
Покрывать Ряд Размера Компосита Протеина
Подводная Лодка 30 Компоситов nm
Ряд 30 до 1000 nm

Введение

Характеризовать положение комплексирования в протеинах первостепенной важности пробуя понять стабилность и эффективность продукта. Качество продукции, и оперируя понятиями чонсервной банкы биологической деятельности и иммуногенности, сильно было повлияно на положением комплексирования протеина. Комплексирование Протеина может произойти на всех шагах в процесс производства (культуру, очищение и образование клетки) и следовательно, путем определять положение комплексирования, изменение/оптимизирование процесса могут быть достиганы.

Новый лазер-основанный nanoparticle отслеживая ситему анализа теперь доступен которая позволяет частицам nanoscale, как протеин суммирует, сразу и индивидуально визуализировать и подсчитано в жидкости в реальное временя, от которого профили распределения по размеру частицы высок-разрешения можно получить. Метод быстрый, робастный, точный и низкая цена представляя привлекательную алтернативу или комплект к существующим методам анализа nanoparticle как Динамический Светлый Разбрасывать, DLS (также известный как Спектроскопия Корреляции Фотона, PCS) или Электронная Микроскопия (EM).

Компоситы Протеина Воображения

Аппаратура NanoSight предлагает уникально проницательность в комплексирование протеина в границах 30 nm-1000 nm.

Диаграмма 1. Типичное изображение произвело методом NanoSight. Изображение позволяет пользователям немедленно узнать некоторые характеристики о их образце.

Диаграмма 2. распределение по размеру Частицы (распределение номера) произведенное от образца показанного в Диаграмме 1.

Покрывать Ряд Размера Компосита Протеина

Исторически несколько методов были использованы для того чтобы характеризовать протеины и комплексирование протеина. Часто методы разъединения использованы для того чтобы различить протеины и компоситы протеина, при более дальнеиший анализ выполненный на отделенном образце.

Аналитически Методы:

Методы Разъединения:

  • Хромотография Исключения Размера (SEC)
  • Фракционировка Подачи Поля (FFF)
  • Электрофорез Капилляра. (CE)
  • Аналитически Ultracentrifugation (AUC)

Подводная Лодка 30 Компоситов nm

Он общий для того чтобы считать SEC спарено с DLS, МОЛАМИ или UV спектроскопией. Хромотографию Исключения Размера можно использовать для того чтобы отделить мономеры протеина от компоситов. Последующий анализ используя DLS например, может произвести точный размер/анализ молекулярного веса для очищенных частей. Над пределом исключения колонки SEC никакое разъединение и следовательно ссыпают ситемы анализа как DLS будут хорошо - одето. Анализ МОЛОВ может помочь уменьшить влияние более больших компоситов в non-фракционированных образцах но метод требует толкования.

Ряд 30 до 1000 nm

Метод NanoSight позволяет компоситам протеина внутри ряд размера 30 - 1000 nm быть индивидуально imaged и определен размер путем отслеживать их Броуновское движение на основание частиц--частицы. анализ Частиц--Частицы позволяет высоким распределениям номера разрешения быть произведенным. Эта зона часто бедно послужена DLS с высокой концентрацией мономера протеина и малого количества больших, ярких компоситов часто преобладая сигнал.

Пока фракционировку можно выполнить как с FFF к анализу помощника DLS, разбавление которое часто необходимо для FFF может сделать этот undesirable трассы должной к потенциалу для более дальнеишего комплексирования. Furthermore, разбавление этих «среднего размера» компоситов часто принимает их под пределом чувствительности для DLS. Метод Nanosight часто не требует никакого разбавления по мере того как 30-1000 компоситов протеина nm часто падают внутри оптимальный ряд концентрации для этого метода.

Отрезок с предела метода NanoSight (30 nm для компоситов протеина) значит что это колоец - одетый для того чтобы укомплектовать SEC/DLS или SEC/UV над пределом исключения SEC. Верхний предел метода NanoSight представляет пункт на котором обычные одиночные методы воображения/obscuration частицы будут применимыми.

Без прежнего разъединения компоситов, DLS типично дало бы двухмодовый для суммированного образца показанного в Диаграмме 3. Первичный пик мимо сформировано от большого количества односегментных частиц, пока вторичный пик был бы сформирован очень большими компоситами которые разбрасывают значительно интенсивности света. Бедно resolved анализ DLS показал бы что никакие частицы между этими пунктами несмотря на их существование как основные односегментные частицы и немногими более большими компоситами не преобладают сигнал.

Диаграмма 3. Изображение произвела аппаратурой Nanosight LM10-HS показывая тяжело суммированный образец протеина.

Пока метод NanoSight был бы неспособен измерить основной односегментный размер по мере того как частицы упали бы под пределом обнаружения метода, над 30 nm, метод обеспечивает анализ частиц--частицы компоситов протеина, уникально формируя распределение номера высок-разрешения суммированных частиц.

Диаграмма 4. Представление распределения размеров частицы которые могут содержаться внутри суммированный образец протеина.

Эта информация найденный, расмотрена и приспособлена от материалов обеспеченных NanoSight.

Для больше информации пожалуйста посетите NanoSight.

Date Added: Dec 22, 2009 | Updated: Mar 7, 2013

Last Update: 7. March 2013 09:29

Ask A Question

Do you have a question you'd like to ask regarding this article?

Leave your feedback
Submit